EGCG-GA-WP纳米复合物的构建及其对关节炎抑制活性

发布时间：2020-07-11 21:25

【摘要】：关节炎是一种发生在人体关节或周围组织,由感染、创伤等因素引起的炎性疾病。我国的关节炎患者人数不断上升,大约在一亿以上。目前缓解关节炎的食品主要是氨基葡萄糖(Gminoglucose,GA),它主要存在于骨关节间的软骨中,是软骨基质和滑液中聚氨基葡萄糖的重要组成成分。表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)是强有力的抗氧化剂和免疫调节剂,可有效抑制炎症。本课题旨在构建乳清蛋白(lactalbumin,WP)纳米载体,增强GA与EGCG抗关节炎效应。通过研究发现,相较于单独使用的EGCG和GA,将两者联用时,对骨关节炎细胞(HFLS-OA)和类风湿性关节炎细胞(HFLS-RA)的抑制活性显著增强(P0.05);当浓度在0.4-0.8 mg·mL~(-1)时,抑制活性相对最好(HFLS-OA为62.9%、HFLS-RA为72.2%);将EGCG-GA偶联WP制备纳米复合物,相对于没有纳米复合的EGCG-GA联合物,其对HFLS-OA和HFLS-RA的抑制活性分别提升了7.6%和5.7%;当EGCG-GA-WP三者的质量比在1:2:8时,纳米复合物对关节炎细胞的抑制活性(HFLS-OA为70.5%、HFLS-RA为77.8%)、载药量(EGCG为86.8%,GA为98.2%)以及稳定性最好。体外模拟人体胃液环境,纳米复合物中的EGCG相较于未复合的EGCG稳定性增强显著(P0.05),体外模拟的人体肠液环境,纳米复合物中的EGCG相较于未复合的EGCG稳定性增强极显著(P0.01)。体外模拟人体胃肠液环境,纳米复合物中的EGCG在120 min时的释放率分别为16.7%和19.4%,均较为缓慢,说明在到达肠道的EGCG-GA-WP纳米复合物中的EGCG大部分还是以纳米的形式被吸收。将EGCG-GA-WP纳米复合物进行冷冻干燥处理后,相对于溶液状态下的纳米复合物其储藏性能提高极显著(P0.01)。在SD大鼠关节炎模型实验中,EGCG-GA-WP纳米复合物对大鼠关节症状的缓解作用与阳性对照组塞来昔布相比没有差异性(P0.05)。但相较于EGCG-GA-WP纳米复合物,塞来昔布会对大鼠机体造成一定的毒性,且差异极显著(P0.01);其次,对比GA用药,EGCG-GA-WP纳米复合物对关节炎症状的缓解效果显著增强(P0.05),说明两者联合使用发挥了更好的作用。
【学位授予单位】：浙江农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TB383.1;TS201.4;R684.3
【图文】：

图.省曰{)HFLS-R决

细胞活力,细胞,抑制性,抑制活性

图 2-2 不同 GA 浓度对 HFLS-OA 和 HFLS-RA 细胞活力的影响（48h，MTT）Figure 2-2 Effect of different GAconcentrations on the activity of HFLS-OAand HFLS-RAcells(48h, MTT)2.3.3 EGCG-GA 不同配比对关节炎细胞抑制效果的影响按上述方法实验并对实验结果处理和计算得出两种关节炎细胞暴露于 EGCG-GA不同浓度配比下的细胞活力。如图 2-3 所示，EGCG-GA 对 HFLS-OA 细胞、HFLS-RA 细胞均具有一定的抑制性，并且在一定范围内随着两者浓度的升高，对两种细胞的抑制活性显著增强（P<0.05）。当浓度达到 0.4-0.8mg·mL-1时，细胞抑制活性接近于最高值，继续增加 EGCG-GA 的浓度对两种细胞的抑制活性均没有明显性增强（P>0.05）。当 GA 浓度在 0.4-0.8mg·mL-1时，对 HFLS-OA 细胞（62.9%）和 HFLS-RA 细胞（72.2%）的抑制性相对最好。相对于单独使用的 EGCG 和 GA，两者联合对 HFLS-

细胞活力,配比,植物多酚,营养素

第二章 EGCG-GA 联用对关节炎细胞抑制活性研究强。另外，EGCG 作为植物营养素的一种，已被 Salahuddin[82]、Ohishi 等人[83]证实具有抗炎效应。因此，综合前人实验研究成果与本文实验结果可以发现，植物多酚营养素 EGCG 与 GA 联合使用时，可以发挥更好的效应。

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