醋蛋液降血脂物质基础及机制分析

发布时间：2020-08-01 09:48

【摘要】：醋蛋液,由鸡蛋和醋通过一定条件制成,是一种在中国已经流传很久的健康饮品。醋蛋液虽具有很多活性作用,但对于醋蛋液降血脂作用的研究甚少且机制不清楚。因此,本文主要测定了醋蛋液的营养组成,结合体内和体外实验探究了醋蛋液的降血脂作用及相关机制,同时模拟人体消化环境制备醋蛋液水解液,结合体外活性实验从中分离、提取和制备新的活性肽,并通过质谱鉴定、分子对接以及动力学等生物信息学方法分析肽与相关配体的作用机制,从而对醋蛋液降血脂物质基础及其机制进行分析,最后根据肽序列进行合成并测定其相关活性,以致在实验和理论上充分证实降血脂作用,为进一步开发利用醋蛋液和三种新的活性肽提供理论依据和数据参考,具体研究结果如下:(1)醋蛋液的营养成分分析和活性研究。通过测定醋蛋液的一般营养成分、氨基酸组成和无机元素含量,发现醋蛋液含有丰富的游离氨基酸和无机元素,其中Glu,Ala,Lys,His和Val等氨基酸的含量高于原本的鸡蛋。体外实验得到醋蛋液相对于阳性对照消胆胺(胆汁酸结合能力100%)有43.21%的胆汁酸结合能力和一定的胆固醇胶束形成抑制能力,同时醋蛋液也展现出一定的抗氧化能力,且其表现出的降血脂活性和抗氧化能力与所含的游离氨基酸有关。通过灌胃方式干预治疗高脂血症小鼠,发现醋蛋液能够有效降低高脂饮食引起的体重增加和脂肪重量,并降低小鼠的TG、TC、LDL-C、LDL-C/HDL-C、MDA水平和ALT、AST、FAS活性,提高HDL-C,SOD和GSH-PX水平,增加粪便胆汁酸排泄量,降低体内胆固醇水平,减少肝脏脂滴积累和脂肪变性程度,抑制EAT中的脂质积累,对小鼠肝脏有一定的保护作用,但对LPS活性和SAT中的脂质积累无显著的调节作用。(2)醋蛋液降血脂肽的分离鉴定和机制分析。以醋蛋液水解物降血脂活性(胰脂酶活性抑制能力、胆汁酸结合能力和胆固醇胶束形成抑制能力)为指标确定制备醋蛋液的最佳工艺条件为浸泡时间4天,温度20℃,醋添加量160 mL。通过超滤分离和质谱鉴定得到825个多肽,根据PeptideRanker和PepSite 2,先筛选出与胰脂酶结合p0.05的5个多肽,即ADHPFLFFIR、TPPFGGFR、SDDGYFFPMPVIR、VGFHCFPK和MYCCLPASWK,以及得到它们的结合位点,进一步通过分子对接和分子动力学分析筛选出3个活性肽,即ADHPFLFFIR,TPPFGGFR和MYCCLPASWK,识别出它们与配体的结合位点,发现这些肽与胆汁酸的强相互作用和其中大量疏水性氨基酸的存在有关,并从结合自由能和能量拆分结果分析发现氢键相互作用,范德华力和静电相互作用也在肽的氨基酸残基与胆汁酸结合的过程中起到重要作用。(3)醋蛋液降血脂肽的合成和活性测定。合成纯度均在95%以上的三种肽,质量分别为1262.60 Da,878.10 Da和1201.50 Da。通过BIOPEP数据库发现本实验发现的肽均是未报道过的新肽,且其中含有一些以前在其他生物活性肽中报道过的活性结构域。并且通过体外降血脂和抗氧化实验发现肽MYCCLPASWK具有最强的降血脂活性和抗氧化活性。但肽TPPFGGFR的ACE抑制活性(48.07%)优于肽ADHPFLFFIR(39.67%)和肽MYCCLPASWK(33.30%)。
【学位授予单位】：合肥工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TS218
【图文】：

胶束形成,抑制能力,胆固醇

16图 2.1 醋蛋液的胆固醇胶束形成抑制能力Cholesterol micellar formation inhibitory ability of vinegar-

抗氧化能力,脂肪组织,脾脏,肝脏

图 2.2 醋蛋液的抗氧化能力Fig 2.2 Antioxidant activities of vinegar-egg in vitro2.3.7 醋蛋液对小鼠体重，肝脏，脾脏和脂肪组织重量的影响

模型小鼠,高脂饮食,氧化应激,小鼠

（注：与 G2 组相比，*p < 0.05，**p < 0.01）图 2.3 醋蛋液对高脂饮食模型小鼠血清相关指标的影响Fig 2.3 Effects of vinegar-egg on serum indicators in hyperlipidemic mice2.3.9 醋蛋液对小鼠氧化应激的影响

【参考文献】