六妹羊肚菌子实体多糖提取工艺优化及结构表征、抗氧化活性研究

发布时间：2020-08-03 16:17

【摘要】：六妹羊肚菌(Morchella sextelata M.Kuo)隶属于子囊菌门Ascomycota、盘菌纲Discomycetes、盘菌目Pezizales、羊肚菌科Morchellaceae、羊肚菌属Morchella Dill.ex Pers,是一类珍贵的食药用真菌,营养美味,具有重要的经济和药用价值。多糖是羊肚菌重要的活性成分,具有免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等多种药理作用。本研究以六妹羊肚菌为材料,对其多糖提取工艺进行优化,明确其理化性质,并对其抗氧化能力进行检测。为六妹羊肚菌多糖抗氧化剂及功能性食品的开发和利用提供研究基础。首先,本研究通过形态学结合分子生物学方法将试验材料鉴定为六妹羊肚菌(M.sextelata)。其次,采用单因素试验结合响应面分析法,对六妹羊肚菌多糖提取工艺进行优化,结果表明其最优提取条件为:提取温度89.94℃、液料比31.07:1 mL/g、提取时间162.86 min,在此条件下预测的多糖得率为23.98%,经实际试验测得的得率为23.4%,与预测结果相符。由此得出响应面优化方法可用于六妹羊肚菌子实体多糖的提取条件的设计。再次,采用Sevage法及透析法去除羊肚菌粗多糖中的蛋白质、色素和小分子物质,得到初步纯化多糖MSP,通过DEAE FF离子交换柱和Sephacry S-400 HR葡聚糖凝胶柱层析得到纯化多糖,命名为MSP2-1。采用凝胶色谱-示差-多角度激光光散射(gel permeation chromatography-refractive index-multi angle laser light scattering,GPC-RI-MALLS)、高效阴离子交换色谱(high performance anion exchange chromatography,HPAEC)、傅里叶变换红外光谱仪(fourier transform infrared spectrometer,FTIR)和气相色谱质谱联用仪(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)对MSP2-1理化性质进行分析。结果表明同,MSP2-1中多糖含量为75.6%、糖醛酸含量为14.5%和蛋白质含量为7.6%。该多糖的分子量为3.178×104Da,主要由甘露糖(75.60%)、葡萄糖(8.28%)、半乳糖(2.62%)、葡萄糖醛酸(2.29%)、果糖(0.59%)、核糖(0.31%)、阿拉伯糖(0.21%)和岩藻糖(0.10%)组成。红外光谱分析的结果进一步证明了 MSP2-1为多糖类物质。甲基化分析的结果表明MSP2-1的糖苷键有7种,摩尔百分比最多的为1,6-Man,达30.07%,其次是1,2-Man、T-Glc、T-man、1,4-Man、1,2,6-Gal和 1,4,6-Man,其摩尔百分比分别为 19.47%、15.62%、11.38%、8.29%、8.21%和6.96%。最后,分别考察了MSP和MSP2-1对2,2-联氮基双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸[2,2-azino bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS]、1,1-苯基-2-苦基肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)、羟自由基和超氧阴离子自由基清除能力。研究结果表明,当浓度达到0.4mg/mL时,MSP和MSP2-1对ABTS的清除率达到99%;当多糖浓度达到2 mg/mL时,MSP和MSP2-1对DPPH的清除率达到93.9%和100%,对羟自由基的清除率分别为70.3%和70.11%。上述结果说明,六妹羊肚菌多糖具有较强的体外抗氧化能力。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S646.7;TS218
【图文】：

标准曲线,标准曲线,葡萄糖

图 3.1 葡萄糖标准曲线Fig. 3.1 The standard curve of determination of glucose content知，葡萄糖标准曲线的线性关系较好（R2=0.9991），得到线性回归方程公式为（Ⅱ）：y=5.3973x－0.0101………………………吸光度值（490 nm）；葡萄糖含量/mg/mL。准曲线公式，计算 MSP2 1 中多糖的含量见表 3 2。量测定标准曲线绘制的方法，绘制糖醛酸标准曲线，如图 3.2 所示。

标准曲线,糖醛酸,标准曲线,糖醛酸含量

图 3.2 糖醛酸标准曲线Fig. 3.2 Standard curve of uronic acid羟联苯法测定糖醛酸浓度，计算得到回归方程为（Ⅲ），（Ⅲ）计算。y=0.3771x－0.0011...........................................................—525 nm 处吸光度值；—糖醛酸浓度/μg/mL；，半乳糖醛酸含量与吸光度呈良好线性关系，可计算样品积及测得的糖醛酸含量，即可得出样品中糖醛酸含量。标准曲线方程式，计算 MSP2 1 中糖醛酸含量见表 3 2。含量测定蛋白（BSA）标准曲线绘制.3 的方法，绘制糖醛酸标准曲线，如图 3.3 所示。

标准曲线,牛血清蛋白,标准曲线,糖醛酸

图 3.2 糖醛酸标准曲线Fig. 3.2 Standard curve of uronic acid联苯法测定糖醛酸浓度，计算得到回归方程为（Ⅲ），RⅢ）计算。y=0.3771x－0.0011..............................................................525 nm 处吸光度值；糖醛酸浓度/μg/mL；半乳糖醛酸含量与吸光度呈良好线性关系，可计算样品中及测得的糖醛酸含量，即可得出样品中糖醛酸含量。准曲线方程式，计算 MSP2 1 中糖醛酸含量见表 3 2。测定白（BSA）标准曲线绘制方法，绘制糖醛酸标准曲线，如图 3.3 所示。

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