皮蛋清热降火及抗炎功效的研究

发布时间：2020-10-17 19:42

　　 皮蛋,又名松花蛋,是由中国首创的传统风味蛋制品,以其清香可口,方便食用等特点受到广大消费者的喜爱。除了皮蛋绝佳的食用性,皮蛋固有的禽蛋特质和其特殊的加工工艺赋予其更多营养价值和功效。中医认为,皮蛋性寒凉,具有清热降火的功效。“上火”一词源于中医的专业术语,现已广泛的运用于人们的日常生活中,其临床表现主要为一系列轻微且反复的疾病。“上火”的具体成因和机制尚不清楚,但研究表明,与上火相关的生物学指标有很多,其中氧化应激以及炎症与其具有重要的关联。目前,对于皮蛋营养价值和功效研究还较为薄弱,基于此,本文通过细胞、动物实验对皮蛋清热降火以及抗炎功效进行研究,以期为后续皮蛋中有效成分的探究奠定基础,并为皮蛋相关的功能产品提供相应的理论依据。主要的研究结果如下:(1)通过建立LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型,对比了皮蛋全蛋(DWPE)、蛋清(DPEW)和蛋黄(DPEY)模拟胃肠道消化产物的抗炎效果。结果表明,LPS刺激炎症模型建立成功后,RAW264.7细胞活性显著升高,DWPE对LPS诱导的细胞活性的异常增加有一定的抑制作用,可能通过调节炎症细胞活性来发挥抗炎活性。DWPE、DPEW和DPEY对细胞中NO含量的增加有显著的下调作用。其中DPEW和DPEY效果更为显著。同时,各浓度的DPEW对TNF-α、IL-6含量具有最佳的下调作用。DPEW和DPEY则对COX-2和iNOS的mRNA表达均有显著的下调作用并成剂量依赖的规律。通过对比,皮蛋蛋清(DPEW)模拟胃肠道消化产物的抗炎效果最佳。(2)探究了DPEW在RAW264.7细胞中发挥抗炎作用的机理。结果表明DPEW可以抑制LPS诱导的炎症反应,抑制炎症介质NO和促炎症细胞因子IL-1β的大量分泌,显著下调TRL4和P65 mRNA的大量表达。DPEW还可以抑制由LPS诱导的IκB、ERK和JNK蛋白的磷酸化,显著阻止P65蛋白的核转移,从而抑制NF-κB和MAPK通路的激活,发挥抗炎的功效。(3)探究了DPEW体外抗氧化能力以及对H_2O_2诱导的RAW264.7细胞损伤的保护作用。结果表明,DPEW具有显著的DPPH、OH·自由基清除能力,DPEW对自由基的清除能力呈现出剂量依赖。其中,DPEW对DPPH自由基清除效果显著优于0.5 mg/mL VC;DPEW对OH·自由基的清除率可达0.5 mg/mL VC的一半。同时,DPEW对三价铁离子具有显著的还原能力,随着浓度的增加呈现出剂量依赖,还原能力可达0.5 mg/mL VC的一半。在细胞模型中,DPEW对H_2O_2诱导的RAW264.7细胞损伤具有保护作用:不同浓度的DPEW对RAW264.7细胞中SOD活性出现不同程度的上调作用,其中,上调SOD活性可达损伤模型组的2倍;类似的,不同浓度的DPEW处理后,RAW264.7细胞中GSH含量也出现了不同程度的上调;NO含量出现不同程度的下调,随着DPEW浓度的升高,细胞中NO含量的协调呈现剂量依赖关系;与此同时,RAW264.7细胞中GSH-px mRNA表达量表现出不同程度的上调。由此可见,DPEW具有良好的抗氧化功效。(4)探究了皮蛋蛋清对促进口腔溃疡大鼠恢复中发挥的作用。结果表明,皮蛋蛋清可以显著减轻大鼠口腔溃疡模型中局部炎症细胞浸润程度,黏膜结构有所恢复,空泡减少,组织结构重塑,缓解了口腔溃疡局部破溃和充血水肿的情况,缩小口腔溃疡面积,增加了PCNA表达阳性程度,促进愈合。同时,皮蛋蛋清可以对口腔溃疡大鼠血清中的TNF-α、IL-6含量均有显著的下调作用,对TNF-α和IL-6基因表达的上调有不同程度的抑制作用,对MDA含量及SOD活力有不同程度的调节作用,具有良好的抗炎和抗氧化作用,发挥了“清热降火”的作用。
【学位单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：TS253.4
【部分图文】：

反应条件：50℃ 2 min，95℃ 10 min；95℃ 30 sec ，60℃ 30 sec，40 cycles，溶解曲线。.6 数据处理描述性统计和方差分析用 IBM SPSS Statistics 21 软件进行数据分析，所有数据均值±方差（x±s）表示，P<0.05 则为统计学上存在显著性差异，用 GraphPadm 软件作图。果与分析 细胞活性的测定205bpReverse 5‘- TCAGGGATGTGAGGAGGGTA-3’Mus INOS Forward 5‘- TTGGCTCCAGCATGTACCCT-3’121bpReverse 5‘- TCCTGCCCACTGAGTTCGTC-3’

皮蛋清热降火和抗炎功效的研究和 DPEY 下培养 24 小时后，RAW264.7 细胞的活性相较于空白对照组的细胞活没有显著的抑制作用。证明在浓度 10-500 μg/mL 范围内，DWPE、DPEW 和 D对 RAW264.7 细胞没有明显的细胞毒性，可以运用以上浓度继续进行下一步的实2.2 脂多糖诱导的细胞活性的测定

图 2-2. DWPE（A）、DPEW 和 DPEY（B）对 LPS 诱导的细胞活性的影响Fig.2-2 The effect of DWPE（A）, DPEW and DPEY（B）on LPS-stimulated cell viability注：字母相同表示差异不显著(P > 0.05)；字母不同表示差异显著(P < 0.05)。由图 2-2 可知，经过 LPS 刺激后，细胞活性均有显著的增加(P<0.05)，增加可达 50%-200%，证明细胞炎症构建成功，同时图 A 中 10、50 和 100 μg/mLDW样品对 LPS 诱导的 RAW264.7 细胞活性的异常增加有显著的的抑制作用，可抑制胞活性异常增加的 25%-50%。2.3 一氧化氮（NO）测定
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本文编号：2845238