腊八蒜黄色素的分离鉴定、稳定性分析及细胞转运机制研究

发布时间：2020-10-22 09:11

　　 腊八蒜黄色素作为一种天然的黄色素具有很大的应用潜力,近年来对腊八蒜黄色素的形成进行了初步探索,但其形成途径和结构仍属于推测阶段。研究腊八蒜黄色素的结构,揭示其稳定性和细胞转运机制对于腊八蒜黄色素的加工利用具有重要意义。本课题在前人的研究基础上取得如下进展:(1)以黄色腊八蒜蒜泥为原料,通过溶剂浸提法提取腊八蒜黄色素,结合醇沉、萃取、柱层析技术去除杂质,并通过液相色谱进一步分离纯化。采用紫外分光光度计和超高效液相色谱质谱技术(UHPLC-MS)进行鉴定分析。腊八蒜黄色素在440 nm处具有一个特征吸收峰,相对分子质量为228。(2)采用热重分析法(TGA)、差式扫描量热法(DSC)和体外消化模拟法揭示了腊八蒜黄色素的热稳定性和胃肠消化中的稳定性。腊八蒜黄色素在T≤140℃和174℃≤T≤244℃存在两次失重,其降解符合一级动力学。构建了黄色素降解动力学模型,能够预测腊八蒜黄色素在不同时间和温度的降解趋势。腊八蒜黄色素在胃消化和肠消化中分别降解了14.82%和35.51%,黄色素在肠道环境中更不稳定。(3)建立了Caco-2细胞模型,通过细胞形态学观察、跨膜电阻值和荧光素钠通量三个评价指标验证细胞模型可用于转运试验。当腊八蒜黄色素浓度小于5 mg/mL时,黄色素对Caco-2细胞无毒性作用。进一步研究色素浓度、转运方向、时间和抑制剂对腊八蒜黄色素转运的影响。在试验浓度和时间内,腊八蒜黄色素的累积转运量与转运浓度和时间成正比,转运方式以被动转运为主,其P_(app)(AP-BL)为1.30×10~-55 cm·s~(-1),说明其在体内吸收度良好。转运过程中可能存在外排蛋白的介导,且受能量抑制剂影响,但不受到P-糖蛋白和多药耐药蛋白的介导。
【学位单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：TS264.4
【部分图文】：

图 2-1 黄色蒜泥Fig. 2-1 Yellow crushed garlic提取 4~5）作为提取溶剂，料液比为 1:4（g/mL蒜泥残渣后，旋转蒸发得到浓缩后溶液。分离纯化糖和蛋白溶液中添加乙醇至乙醇体积分数为 80%以均匀后静置 30 min，12000 r/min 离心 20 浓缩备用。脱脂酸乙酯以 1：1（v/v）的比例在分液漏斗 3 次，以除去溶液中的脂溶性化合物。离纯化腊八蒜黄色素吸附树脂对腊八蒜黄色素进行分离纯化。

0 5 10 15 200.00.51.01.52.00mmAU时间（min）440 nm图 2-4 纯化后腊八蒜黄色素的液相色谱图iquid chromatogram of the yellow pigment after 构鉴定技术可以提供所测化合物的相对分子质量蒜黄色素的总离子流图及相应色谱图如图离子流峰。腊八蒜黄色素的一级质谱图29.0981 的分子离子峰，及其附近的同位。由于正离子模式，因此腊八蒜黄色素的H、O、N 组成的化合物，分子离子峰的索推测分子式为 C13H12N2O2。

图 2-6 腊八蒜黄色素的一级质谱图Fig. 2-6 Mass spectrum of the “Laba” yellow pigmentWang D 和 Hu D 等人通过使用吡咯基甘氨酸、吡咯基缬氨酸、吡咯基异亮氨酸基琥珀酸以及吡咯基戊二酸与丙酮酸反应可以制得黄色素，制得黄色素的相对分均高于本试验鉴定出的黄色素相对分子质量，由此推测与本试验中检测到的不是腊八蒜黄色素。为进一步分析腊八蒜黄色素分子离子峰的结构，在正离子模式下，选择准分子作为母离子，通过不断增加碰撞能量加强气体对正离子的碰撞速度，得到新的子片。图 2-7 碰撞能量分别为 10 V、20 V、30 V 的二级质谱图，图中 m/z 229 为母离撞能量为 10 V 时出现 m/z 183 的子碎片离子，丢失了质核比为 46 的基团，推测 183 的子碎片离子的分子式为[C12H11N2]+。当碰撞能量增加到 30 V 时，出现了新离子，其质核比分别为 168、142 和 115，断裂方式分别为[M-C11H8N2]+、[M-C10H[M-C9H7]+。本文通过液质联用技术鉴定了腊八蒜黄色素的相对分子质量及其碎，其结构式需要结合红外光谱及核磁共振进一步表征。
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本文编号：2851398