俄罗斯鲟鱼卵β’-c糖蛋白的提取分离与结构表征

发布时间：2020-12-05 13:43

　　鱼卵作为一种营养丰富、味道鲜美的海鲜产品,深受大家的喜爱,尤其是鲟鱼卵所制的鱼子酱,价格昂贵,更是被誉为“黑色黄金”。但在国内外,有关鱼卵引起过敏的报道却屡见不鲜。研究发现,鱼卵是一种潜在的含有过敏原的食物,其主要的过敏原为βP-c糖蛋白。大多数因鱼卵过敏的病例都被归类为I型过敏症,由过敏原与IgE特异性结合引起。目前,与其他食物过敏原相比,鱼卵中过敏性蛋白的生化特性以及结构方面的信息较少,β’-c糖蛋白的结构信息尚不明确,而糖基化承载了大量的生物学信息。因此,分析鱼卵中主要过敏原β’-c糖蛋白的结构非常重要,其可为深入研究鱼卵致敏机理提供理论基础。本课题以俄罗斯鲟鱼（Acipenser gueldenstaedti）鱼卵为试验材料,提取、分离、纯化鲟鱼卵中的β’-c糖蛋白,并对其进行结构表征。主要研究结果如下:1.鲟鱼卵β’-c糖蛋白的提取及分离纯化:采用氯化钠盐溶液提取法制备卵黄蛋白提取物,测定提取物中总蛋白和多糖的含量。再利用硫酸铵分级沉淀法对卵黄蛋白提取物进行初步粗分离,随后采取热处理、碱处理及超速离心的方法对卵黄蛋白进一步分离纯化,并用PAS染色法鉴定糖蛋白。结果表明:氯化钠... 

【文章来源】：浙江工商大学浙江省

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
    1.1 鱼卵的研究进展
        1.1.1 鱼卵的概况
        1.1.2 鱼卵的加工现状
        1.1.3 鲟鱼卵及副产品
        1.1.4 鱼卵过敏原的研究状况
    1.2 鱼卵中卵黄蛋白原的研究现状
        1.2.1 卵黄蛋白原简介
        1.2.2 鱼类卵黄蛋白原的结构特性
        1.2.3 鱼类卵黄蛋白原的免疫功能
    1.3 糖蛋白的研究现状
        1.3.1 糖蛋白简介
        1.3.2 蛋白质糖基化
        1.3.3 糖蛋白的质谱研究
        1.3.4 糖蛋白研究所面临的挑战
    1.4 本研究的目的和意义
    1.5 本论文的主要研究内容
第2章 鲟鱼卵β'-c糖蛋白的提取及分离纯化
    2.1 引言
    2.2 实验材料与仪器
        2.2.1 材料与处理
        2.2.2 主要仪器和试剂
    2.3 实验方法
        2.3.1 卵黄糖蛋白粗提物的制备
        2.3.2 卵黄糖蛋白粗提物的初步分离
        2.3.3 BCA试剂盒测定卵黄糖蛋白蛋白含量
        2.3.4 苯酚硫酸法测定卵黄糖蛋白多糖含量
        2.3.5 SDS-PAGE电泳分析
        2.3.6 热处理分离纯化卵黄糖蛋白
        2.3.7 碱处理分离纯化卵黄糖蛋白
        2.3.8 超速离心法进一步纯化卵黄糖蛋白
        2.3.9 PAS染色法鉴定糖蛋白
    2.4 结果与分析
        2.4.1 卵黄糖蛋白蛋白含量分析
        2.4.2 卵黄糖蛋白多糖含量分析
        2.4.3 卵黄糖蛋白初步分离结果比较
        2.4.4 热处理与碱处理分离纯化卵黄糖蛋白
        2.4.5 PAS染色法鉴定糖蛋白
        2.4.6 超速离心法进一步纯化卵黄糖蛋白
    2.5 本章小结
第3章 鲟鱼卵β'-c糖蛋白蛋白部分的结构表征
    3.1 引言
    3.2 实验材料与仪器
        3.2.1 材料与处理
        3.2.2 主要实验仪器和试剂
    3.3 实验方法
        3.3.1 卵黄糖蛋白组分亚基分析
        3.3.2 蛋白质胶条内酶切
        3.3.3 液相质谱联用（LC-MS/MS）分析
        3.3.4 蛋白数据库检索分析
        3.3.5 鲟鱼卵卵黄糖蛋白生物信息学分析
        3.3.6 氨基酸序列同源性分析
        3.3.7 圆二色（CD）光谱分析糖蛋白二级结构
    3.4 结果与分析
        3.4.1 卵黄糖蛋白组分亚基分析
        3.4.2 鲟鱼卵卵黄糖蛋白鉴定结果分析
        3.4.3 鲟鱼卵卵黄糖蛋白生物信息学分析
        3.4.4 鲟鱼卵β'-c蛋白同源性分析
        3.4.5 圆二色（CD）光谱分析β,-c糖蛋白的二级结构
    3.5 本章小结
第4章 鲟鱼卵β'-c糖蛋白糖肽及糖链的结构表征
    4.1 引言
    4.2 实验材料与仪器
        4.2.1 材料与处理
        4.2.2 主要实验仪器和试剂
    4.3 实验方法
        4.3.1 N-型糖苷键的鉴定
        4.3.2 O-型糖苷键的鉴定
        4.3.3 糖蛋白中糖肽的制备及富集纯化
        4.3.4 糖肽中N-糖链的释放及分离纯化
        4.3.5 糖肽中N-糖链的完全甲基化及分离纯化
        4.3.6 ESI（+）多级质谱分析N-糖链结构
n液质联用分析糖肽结构 ">        4.3.7 HILIC-MSⁿ液质联用分析糖肽结构
        4.3.8 糖链及糖肽的数据分析
    4.4 结果与分析
        4.4.1 N-型糖苷键的鉴定结果分析
        4.4.2 O-型糖苷键的鉴定结果分析
        4.4.3 鲟鱼卵β'-c糖蛋白糖链的结构鉴定
        4.4.4 鲟鱼卵β'-c糖蛋白糖肽的结构鉴定
    4.5 本章小结
第5章 总结
    5.1 主要研究结论
    5.2 创新点
    5.3 展望
参考文献
附录: 中英文缩略词对照
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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硕士论文
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[2]双齿围沙蚕雌激素受体和卵黄蛋白原基因的克隆及在苯并（a）芘诱导下的表达特征[D]. 岳宗豪.大连海洋大学 2014
[3]大黄鱼鱼卵和鱼精过敏原的性质研究[D]. 刘妍妘.集美大学 2014



本文编号：2899541