重组果聚糖蔗糖酶的表达、纯化及其产物Levan果聚糖的性质和应用研究
发布时间：2021-02-25 03:53
果聚糖由多个β-D-呋喃果糖聚合而成,是一种水溶性膳食纤维,大致分为两类:菊粉（Inulin）与左聚糖（Levan）。由于人体内的消化酶无法分解果聚糖的糖苷键,因此果聚糖的消化过程和代谢途径与其他碳水化合物有较大差异[1]。不同聚合度的Levan果聚糖溶解度不同,随着聚合度降低,溶解度逐渐增大。目前已研究的Levan果聚糖聚合度不高,因而呈现黏度小和假塑性流体的特点。本课题对来源于Erwinia amylovora ATCC49946的果聚糖蔗糖酶基因序列与质粒进行重组,并转入大肠杆菌进行表达,获得重组果聚糖蔗糖酶。重组果聚糖蔗糖酶以蔗糖为底物反应得到Levan果聚糖。本课题主要从两个方面对Levan果聚糖进行研究,包括Levan果聚糖本身性质与其他商业胶的对比以及Levan果聚糖在生物复合材料领域的应用研究。酶学性质实验表明,重组果聚糖蔗糖酶的最适反应条件为pH7.0、35°C和20%的底物浓度。在最优条件下,重组果聚糖的催化反应能从500 g/L蔗糖中提取出184±3g/L的Levan果聚糖。Levan果聚糖平均分子量约为2.017×107
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 果聚糖概述
1.2 Levan果聚糖概述
1.2.1 Levan果聚糖的结构及理化性质
1.2.2 Levan果聚糖的功能与应用
1.2.3 Levan果聚糖的合成
1.2.4 常见商业胶的性质与应用
1.3 Levan的生物合成
1.3.1 Levan果聚糖蔗糖酶的酶学性质
1.3.2 Levan果聚糖蔗糖酶的晶体结构
1.3.3 Levan果聚糖蔗糖酶的合成机制
1.4 两种纳米材料的简介
1.4.1 纳米复合材料简介
1.4.2 纳米缓释、控释给药载体材料简介
1.5 蒙脱土与牛血清蛋白简介
1.5.1 蒙脱土的性质与应用
1.5.2 牛血清蛋白的性质与应用
1.6 本课题的立题背景及意义
1.7 研究思路与主要内容
第二章 材料与方法
2.1 实验材料与仪器
2.1.1 主要实验试剂
2.1.2 主要实验仪器
2.2 各类试剂的配制
2.2.1 各类培养基的配置
2.2.2 纯化酶蛋白相关试剂
2.2.3 凝胶电泳
2.3 实验方法
2.3.1 重组质粒的构建
2.3.2 高效感受态细胞的制备
2.3.3 E.coil重组工程菌的构建以及重组酶的诱导表达
2.3.4 重组质粒的验证
2.3.5 琼脂糖凝胶电泳
2.3.6 重组酶的分离纯化
2.3.7 SDS-PAGE凝胶电泳检测
2.3.8 重组酶的酶活测定
2.3.9 酶学性质
2.3.10 产物制备与纯化
2.3.11 产物性质鉴定
2.3.12 两种纳米材料的制备
2.3.13 微观结构分析
2.3.14 热力学行为分析
2.3.15 流变学行为与结构特性分析
2.3.16 广角X射线衍射
2.3.17 圆二色谱分析
2.3.18 纳米颗粒粒径与包封率测定
第三章 结果与讨论
3.1 Eram-LS的生物信息分析
3.2 Eram-LS的异源表达及分离纯化
3.3 Eram-LS酶学性质研究
3.3.1 p H与温度对Eram-LS的酶活的影响
3.3.2 Eram-LS重组酶反应动力学研究
3.3.3 反应产物鉴定
3.4 Eram-Levan性质鉴定
3.4.1 Eram-Levan分子量的测定
3.4.2 Eram-Levan微观结构分析
3.4.3 Eram-Levan热力学分析
3.4.4 Eram-Levan流变学行为分析
3.4.5 Eram-Levan结构特性分析
3.5 Levan果聚糖的复合材料
3.5.1 Levan/MMT复合材料的微观结构分析
3.5.2 Levan/MMT复合材料的X射线衍射分析
3.5.3 Levan/MMT复合材料的热力学分析
3.5.4 Levan/MMT复合材料的流变学行为分析
3.5.6 光谱分析
3.5.7 纳米颗粒的递送分析
主要结论与展望
主要结论
展望
致谢
参考文献
附录 :作者在攻读硕士期间发表的论文
本文编号：3050400
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 果聚糖概述
1.2 Levan果聚糖概述
1.2.1 Levan果聚糖的结构及理化性质
1.2.2 Levan果聚糖的功能与应用
1.2.3 Levan果聚糖的合成
1.2.4 常见商业胶的性质与应用
1.3 Levan的生物合成
1.3.1 Levan果聚糖蔗糖酶的酶学性质
1.3.2 Levan果聚糖蔗糖酶的晶体结构
1.3.3 Levan果聚糖蔗糖酶的合成机制
1.4 两种纳米材料的简介
1.4.1 纳米复合材料简介
1.4.2 纳米缓释、控释给药载体材料简介
1.5 蒙脱土与牛血清蛋白简介
1.5.1 蒙脱土的性质与应用
1.5.2 牛血清蛋白的性质与应用
1.6 本课题的立题背景及意义
1.7 研究思路与主要内容
第二章 材料与方法
2.1 实验材料与仪器
2.1.1 主要实验试剂
2.1.2 主要实验仪器
2.2 各类试剂的配制
2.2.1 各类培养基的配置
2.2.2 纯化酶蛋白相关试剂
2.2.3 凝胶电泳
2.3 实验方法
2.3.1 重组质粒的构建
2.3.2 高效感受态细胞的制备
2.3.3 E.coil重组工程菌的构建以及重组酶的诱导表达
2.3.4 重组质粒的验证
2.3.5 琼脂糖凝胶电泳
2.3.6 重组酶的分离纯化
2.3.7 SDS-PAGE凝胶电泳检测
2.3.8 重组酶的酶活测定
2.3.9 酶学性质
2.3.10 产物制备与纯化
2.3.11 产物性质鉴定
2.3.12 两种纳米材料的制备
2.3.13 微观结构分析
2.3.14 热力学行为分析
2.3.15 流变学行为与结构特性分析
2.3.16 广角X射线衍射
2.3.17 圆二色谱分析
2.3.18 纳米颗粒粒径与包封率测定
第三章 结果与讨论
3.1 Eram-LS的生物信息分析
3.2 Eram-LS的异源表达及分离纯化
3.3 Eram-LS酶学性质研究
3.3.1 p H与温度对Eram-LS的酶活的影响
3.3.2 Eram-LS重组酶反应动力学研究
3.3.3 反应产物鉴定
3.4 Eram-Levan性质鉴定
3.4.1 Eram-Levan分子量的测定
3.4.2 Eram-Levan微观结构分析
3.4.3 Eram-Levan热力学分析
3.4.4 Eram-Levan流变学行为分析
3.4.5 Eram-Levan结构特性分析
3.5 Levan果聚糖的复合材料
3.5.1 Levan/MMT复合材料的微观结构分析
3.5.2 Levan/MMT复合材料的X射线衍射分析
3.5.3 Levan/MMT复合材料的热力学分析
3.5.4 Levan/MMT复合材料的流变学行为分析
3.5.6 光谱分析
3.5.7 纳米颗粒的递送分析
主要结论与展望
主要结论
展望
致谢
参考文献
附录 :作者在攻读硕士期间发表的论文
本文编号：3050400
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/qgylw/3050400.html
