核桃降血糖活性肽的分离纯化、结构鉴定及降血糖作用机理研究
发布时间：2021-04-23 20:39
据国际糖尿病联盟（IDF）最新公布的数据,截止到2019年,我国糖尿病患者约为1.164亿人,已成为全球患病人数最多的国家。2型糖尿病（T2DM）在糖尿病人群中所占比例高达90%,其可诱发心血管疾病、肾病、视网膜病变以及神经病变等并发症,给患者家庭和社会带来沉重的经济负担。T2DM并非终身性慢性疾病,可通过适当的膳食干预得到有效的预防和改善。因此,开发天然、安全、高效的食品功能因子以替代传统药物对T2DM进行膳食干预具有十分重要的现实意义。我国核桃资源丰富,分离自核桃仁蛋白的核桃蛋白酶解物（WHPs,3-10kDa）已被证实具有降血糖活性,但活性肽的结构和在关键调控中的作用机理有待进一步明确。本文主要对核桃活性肽的制备、纯化、结构鉴定及降血糖活性进行了系统研究。主要研究结果如下:（1）在完成WHPs（3-10kDa）Sephadex G25和Sephadex G15葡聚糖凝胶分离纯化的基础上,采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）对核桃水解肽进一步分离纯化,得到单一组分F1。利用电喷雾串联质谱（ESI-MS/MS）技术对组分F1进行结构鉴定,共获得432种具有不同氨基酸序列的活性肽。根...
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
1.1 选题来源
1.2 核桃概述
1.2.1 核桃的营养价值
1.2.2 核桃的生理功能
1.2.3 核桃多肽的研究进展
1.3 糖尿病的概述
1.3.1 糖尿病的定义
1.3.2 糖尿病的分类与症状
1.3.3 T2DM的治疗药物
1.3.4 T2DM与氧化应激的关系
1.4 IRS-1/PI3K/Akt信号通路
1.5 AMPK信号通路
1.6 论文研究目的与意义
1.7 论文研究的主要内容
1.8 创新点
1.9 实验技术路线
第二章 核桃降血糖活性肽的分离纯化及结构鉴定
2.1 材料和方法
2.1.1 材料
2.1.1.1 实验原料
2.1.1.2 试剂
2.1.1.3 仪器与设备
2.1.2 方法
2.1.2.1 RP-HPLC分离纯化
2.1.2.2 ESI-MS/MS结构鉴定
2.1.2.3 降血糖活性肽的合成
2.2 结果
2.2.1 核桃降血糖活性肽的RP-HPLC色谱
2.2.2 核桃降血糖活性肽的ESI-MS/MS结构鉴定
2.2.3 核桃降血糖活性肽的固相合成
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 核桃活性肽的降血糖及抗氧化活性研究
3.1 材料和方法
3.1.1 材料
3.1.1.1 实验原料
3.1.1.2 试剂
3.1.1.3 仪器与设备
3.1.2 方法
3.1.2.1 α-葡萄糖苷酶抑制率
3.1.2.2 α-淀粉酶抑制率
3.1.2.3 氧自由基吸收能力（ORAC）
3.1.2.4 HepG2细胞培养
3.1.2.5 核桃活性肽对HepG2细胞活力的影响（MTT法）
3.1.2.6 IR HepG2细胞模型的建立
3.1.2.7 核桃活性肽对IR HepG2细胞模型葡萄糖消耗量的测定
3.1.2.8 核桃活性肽对IR HepG2细胞模型抗氧化能力的测定
3.1.2.9 统计分析
3.2 结果
3.2.1 核桃活性肽对α-葡萄糖苷酶抑制率验证
3.2.2 核桃活性肽对α-淀粉酶抑制率验证
3.2.3 核桃活性肽的氧自由基吸收能力（ORAC）
3.2.4 核桃活性肽对HepG2细胞活力的影响
3.2.5 IR HepG2细胞模型的建立
3.2.6 核桃活性肽对IR HepG2细胞模型葡萄糖消耗量的影响
3.2.7 核桃活性肽对IR HepG2细胞模型抗氧化活性的影响
3.3 讨论
3.4 小结
第四章 核桃活性肽对IR HepG2细胞葡萄糖代谢的影响及调控机制
4.1 材料和方法
4.1.1 材料
4.1.1.1 实验原料
4.1.1.2 试剂
4.1.1.3 仪器与设备
4.1.2 方法
4.1.2.1 细胞总蛋白提取
4.1.2.2 蛋白免疫印迹（Western Blot）测定蛋白表达
4.1.2.3 高碘酸-Schiff（PAS）糖原染色法
4.1.2.4 GLUT4免疫荧光染色
4.1.2.5 统计分析
4.2 结果
4.2.1 LPLLR通过促进IR HepG2细胞中GLUT4的表达和易位来改善葡萄糖摄取
4.2.2 LPLLR通过上调IR HepG2细胞中的p-GSK-3β促进糖原合成
4.2.3 LPLLR通过下调与IR HepG2细胞糖异生有关的酶和转录因子来抑制肝脏糖异生
4.2.4 LPLLR通过激活IR HepG2细胞中的IRS-1/PI3K/Akt和AMPK信号通路来改善IR
4.2.5 LPLLR对IR HepG2细胞中IRS-1/PI3K/Akt和AMPK信号通路的总结
4.3 讨论
4.4 小结
第五章 核桃活性肽LPLLR的稳定性研究
5.1 材料和方法
5.1.1 材料
5.1.1.1 实验原料
5.1.1.2 试剂
5.1.1.3 仪器与设备
5.1.2 方法
5.1.2.1 LPLLR的热稳定性分析
5.1.2.2 LPLLR的酸碱稳定性分析
5.1.2.3 LPLLR的模拟胃肠道消化稳定性分析
5.1.2.4 统计分析
5.2 结果
5.2.1 LPLLR的热稳定性分析结果
5.2.2 LPLLR的酸碱稳定性分析结果
5.2.3 LPLLR的模拟胃肠道消化稳定性分析结果
5.3 讨论
5.4 小结
结论
参考文献
作者简介
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]核桃的营养保健功能及功能成分研究进展[J]. 李俊南,习学良,熊新武,杨建华,张雨思. 中国食物与营养. 2018(05)
[2]核桃多肽的抗氧化活性及其分子量、氨基酸组成特性研究[J]. 李汉洋,李建杰,王帅,徐兴华,蓝文言,梁宇鹏,张珍兰,荣瑞芬. 食品工业科技. 2018(13)
[3]我国核桃起源问题探究[J]. 王根宪. 西北园艺(果树). 2015(06)
[4]山核桃营养价值与种植经济效益分析[J]. 李新委,谢世友,马燕. 农学学报. 2015(02)
[5]长白山核桃球蛋白的提取、分离纯化及其功能性质研究[J]. 王晓飞,闵伟红,朱运明,刘春雷,吴丹,崔玲玉,刘景圣. 现代食品科技. 2015(04)
[6]核桃多肽对D-半乳糖诱导老年小鼠血脂水平的影响[J]. 杨子明,刘金磊,颜小捷,李典鹏. 食品科学. 2015(09)
[7]食用核桃可降低糖尿病风险[J]. 陈铮. 中国食品学报. 2013(04)
[8]核桃多肽功能特性的研究[J]. 姜莉,徐怀德,陈金海. 食品科技. 2013(01)
[9]核桃油、紫苏油、α-亚麻酸、亚油酸对大鼠学习记忆的影响[J]. 陈亮,王丽梅,郭艳芬,肖娜,陶兴无,刘志国,刘大川,刘烈炬. 中国油脂. 2011(10)
[10]核桃多肽的制备及核桃多肽酒的研制[J]. 姜莉,徐怀德,陈金海,姜晨曦,何玉君. 食品科学. 2009(08)
博士论文
[1]玉米抗氧化肽活性氧清除作用与抗氧化基因表达调节作用研究[D]. 王丽英.吉林大学 2018
[2]β酪啡肽在大鼠胃肠道内的释放、吸收和稳定特性及其对胃肠机能的影响[D]. 宗亚峰.南京农业大学 2007
[3]苦瓜降糖多肽-P的分离纯化及降糖机理研究[D]. 盛清凯.江南大学 2005
硕士论文
[1]降血糖活性肽制备及抑制α-葡萄糖苷酶活性肽纯化与鉴定[D]. 赵红星.哈尔滨工业大学 2018
[2]亚麻籽抗氧化肽制备、活性鉴定及降血糖研究[D]. 王惠敏.福州大学 2018
[3]核桃生物活性评价及其乳剂制备工艺研究[D]. 李丽琪.武汉工程大学 2017
[4]核桃多肽降血糖功能效果研究[D]. 杜侃莹.吉林农业大学 2017
[5]核桃多肽防治糖尿病物质基础及作用机制研究[D]. 李丽.武汉工程大学 2016
[6]汉麻籽粕降血糖肽的酶法制备及其分离纯化[D]. 梁凯.华南理工大学 2014
[7]T3对氧化应激诱导的HepG2细胞氧化还原状态及糖代谢的影响[D]. 陈立立.江南大学 2014
[8]啤酒糟多肽的分离纯化及降血糖活性研究[D]. 田应娟.华南理工大学 2011
[9]醋蛋酶解产物生物活性成分的研究[D]. 陈黎斌.江南大学 2006
本文编号：3156003
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
1.1 选题来源
1.2 核桃概述
1.2.1 核桃的营养价值
1.2.2 核桃的生理功能
1.2.3 核桃多肽的研究进展
1.3 糖尿病的概述
1.3.1 糖尿病的定义
1.3.2 糖尿病的分类与症状
1.3.3 T2DM的治疗药物
1.3.4 T2DM与氧化应激的关系
1.4 IRS-1/PI3K/Akt信号通路
1.5 AMPK信号通路
1.6 论文研究目的与意义
1.7 论文研究的主要内容
1.8 创新点
1.9 实验技术路线
第二章 核桃降血糖活性肽的分离纯化及结构鉴定
2.1 材料和方法
2.1.1 材料
2.1.1.1 实验原料
2.1.1.2 试剂
2.1.1.3 仪器与设备
2.1.2 方法
2.1.2.1 RP-HPLC分离纯化
2.1.2.2 ESI-MS/MS结构鉴定
2.1.2.3 降血糖活性肽的合成
2.2 结果
2.2.1 核桃降血糖活性肽的RP-HPLC色谱
2.2.2 核桃降血糖活性肽的ESI-MS/MS结构鉴定
2.2.3 核桃降血糖活性肽的固相合成
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 核桃活性肽的降血糖及抗氧化活性研究
3.1 材料和方法
3.1.1 材料
3.1.1.1 实验原料
3.1.1.2 试剂
3.1.1.3 仪器与设备
3.1.2 方法
3.1.2.1 α-葡萄糖苷酶抑制率
3.1.2.2 α-淀粉酶抑制率
3.1.2.3 氧自由基吸收能力（ORAC）
3.1.2.4 HepG2细胞培养
3.1.2.5 核桃活性肽对HepG2细胞活力的影响（MTT法）
3.1.2.6 IR HepG2细胞模型的建立
3.1.2.7 核桃活性肽对IR HepG2细胞模型葡萄糖消耗量的测定
3.1.2.8 核桃活性肽对IR HepG2细胞模型抗氧化能力的测定
3.1.2.9 统计分析
3.2 结果
3.2.1 核桃活性肽对α-葡萄糖苷酶抑制率验证
3.2.2 核桃活性肽对α-淀粉酶抑制率验证
3.2.3 核桃活性肽的氧自由基吸收能力（ORAC）
3.2.4 核桃活性肽对HepG2细胞活力的影响
3.2.5 IR HepG2细胞模型的建立
3.2.6 核桃活性肽对IR HepG2细胞模型葡萄糖消耗量的影响
3.2.7 核桃活性肽对IR HepG2细胞模型抗氧化活性的影响
3.3 讨论
3.4 小结
第四章 核桃活性肽对IR HepG2细胞葡萄糖代谢的影响及调控机制
4.1 材料和方法
4.1.1 材料
4.1.1.1 实验原料
4.1.1.2 试剂
4.1.1.3 仪器与设备
4.1.2 方法
4.1.2.1 细胞总蛋白提取
4.1.2.2 蛋白免疫印迹（Western Blot）测定蛋白表达
4.1.2.3 高碘酸-Schiff（PAS）糖原染色法
4.1.2.4 GLUT4免疫荧光染色
4.1.2.5 统计分析
4.2 结果
4.2.1 LPLLR通过促进IR HepG2细胞中GLUT4的表达和易位来改善葡萄糖摄取
4.2.2 LPLLR通过上调IR HepG2细胞中的p-GSK-3β促进糖原合成
4.2.3 LPLLR通过下调与IR HepG2细胞糖异生有关的酶和转录因子来抑制肝脏糖异生
4.2.4 LPLLR通过激活IR HepG2细胞中的IRS-1/PI3K/Akt和AMPK信号通路来改善IR
4.2.5 LPLLR对IR HepG2细胞中IRS-1/PI3K/Akt和AMPK信号通路的总结
4.3 讨论
4.4 小结
第五章 核桃活性肽LPLLR的稳定性研究
5.1 材料和方法
5.1.1 材料
5.1.1.1 实验原料
5.1.1.2 试剂
5.1.1.3 仪器与设备
5.1.2 方法
5.1.2.1 LPLLR的热稳定性分析
5.1.2.2 LPLLR的酸碱稳定性分析
5.1.2.3 LPLLR的模拟胃肠道消化稳定性分析
5.1.2.4 统计分析
5.2 结果
5.2.1 LPLLR的热稳定性分析结果
5.2.2 LPLLR的酸碱稳定性分析结果
5.2.3 LPLLR的模拟胃肠道消化稳定性分析结果
5.3 讨论
5.4 小结
结论
参考文献
作者简介
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]核桃的营养保健功能及功能成分研究进展[J]. 李俊南,习学良,熊新武,杨建华,张雨思. 中国食物与营养. 2018(05)
[2]核桃多肽的抗氧化活性及其分子量、氨基酸组成特性研究[J]. 李汉洋,李建杰,王帅,徐兴华,蓝文言,梁宇鹏,张珍兰,荣瑞芬. 食品工业科技. 2018(13)
[3]我国核桃起源问题探究[J]. 王根宪. 西北园艺(果树). 2015(06)
[4]山核桃营养价值与种植经济效益分析[J]. 李新委,谢世友,马燕. 农学学报. 2015(02)
[5]长白山核桃球蛋白的提取、分离纯化及其功能性质研究[J]. 王晓飞,闵伟红,朱运明,刘春雷,吴丹,崔玲玉,刘景圣. 现代食品科技. 2015(04)
[6]核桃多肽对D-半乳糖诱导老年小鼠血脂水平的影响[J]. 杨子明,刘金磊,颜小捷,李典鹏. 食品科学. 2015(09)
[7]食用核桃可降低糖尿病风险[J]. 陈铮. 中国食品学报. 2013(04)
[8]核桃多肽功能特性的研究[J]. 姜莉,徐怀德,陈金海. 食品科技. 2013(01)
[9]核桃油、紫苏油、α-亚麻酸、亚油酸对大鼠学习记忆的影响[J]. 陈亮,王丽梅,郭艳芬,肖娜,陶兴无,刘志国,刘大川,刘烈炬. 中国油脂. 2011(10)
[10]核桃多肽的制备及核桃多肽酒的研制[J]. 姜莉,徐怀德,陈金海,姜晨曦,何玉君. 食品科学. 2009(08)
博士论文
[1]玉米抗氧化肽活性氧清除作用与抗氧化基因表达调节作用研究[D]. 王丽英.吉林大学 2018
[2]β酪啡肽在大鼠胃肠道内的释放、吸收和稳定特性及其对胃肠机能的影响[D]. 宗亚峰.南京农业大学 2007
[3]苦瓜降糖多肽-P的分离纯化及降糖机理研究[D]. 盛清凯.江南大学 2005
硕士论文
[1]降血糖活性肽制备及抑制α-葡萄糖苷酶活性肽纯化与鉴定[D]. 赵红星.哈尔滨工业大学 2018
[2]亚麻籽抗氧化肽制备、活性鉴定及降血糖研究[D]. 王惠敏.福州大学 2018
[3]核桃生物活性评价及其乳剂制备工艺研究[D]. 李丽琪.武汉工程大学 2017
[4]核桃多肽降血糖功能效果研究[D]. 杜侃莹.吉林农业大学 2017
[5]核桃多肽防治糖尿病物质基础及作用机制研究[D]. 李丽.武汉工程大学 2016
[6]汉麻籽粕降血糖肽的酶法制备及其分离纯化[D]. 梁凯.华南理工大学 2014
[7]T3对氧化应激诱导的HepG2细胞氧化还原状态及糖代谢的影响[D]. 陈立立.江南大学 2014
[8]啤酒糟多肽的分离纯化及降血糖活性研究[D]. 田应娟.华南理工大学 2011
[9]醋蛋酶解产物生物活性成分的研究[D]. 陈黎斌.江南大学 2006
本文编号：3156003
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