不同食物蛋白载DHA自组装胶束的构建及生物活性的比较分析
发布时间：2021-07-21 16:58
二十二碳六烯酸（DHA）是n-3系列不饱和脂肪酸,具有良好的抗氧化性、降脂功能和抗癌效果。然而,DHA在加工和贮藏过程中易被氧化分解,在光照和高温下极易失活,如何保持DHA活性成为了亟待解决的技术难题。本研究分别选取卵清蛋白胶束、肌球蛋白胶束、大豆球蛋白胶束和β-乳球蛋白酶解制备蛋白胶束用于封装DHA,四种蛋白经过胰凝乳蛋白酶部分酶解形成两亲性肽,将DHA包埋在胶束内部,通过探究胶束结构特性和对DHA生物活性的影响,对四种载DHA蛋白胶束进行比较分析。结果表明:通过荧光光谱和圆二色谱测定四种蛋白酶解后蛋白的二级结构和荧光猝灭情况,证明四种蛋白均能自组装成载DHA蛋白胶束。载DHAβ-乳球蛋白胶束电动电势为-24.3mV,结构体系最为稳定;载DHA大豆球蛋白胶束α-螺旋减少2.6%,DHA包封率和包埋量最大,分别为91.53%和196;载DHA肌球蛋白粒径最小,为23 nm;卵清蛋白胶束电动电势-18.3,平均粒径38 nm,包埋量185。进一步对递送体系的稳定性和体外抗氧化性进行测定,载DHAβ-乳球蛋白胶束水溶性最好,稳定性较好,高温下留存率34.83%,紫外照射下留存率36.42%...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
蛋白封装DHA胶束的形态（80K）
油红O染色结果图（40×）
4蛋白自组装DHA胶束的降脂活性的研究34酸水平升高，导致通风、心血管疾病的发生（KayserB，VergesS，2013）。由图4-10可知，棕榈酸刺激下，细胞内UA水平明显升高，对照组与模型组有显著性差异（P<0.05），四组蛋白胶束的UA含量与模型组均无显著性差异，四组载DHA蛋白胶束与DHA组均有显著性差异，表明DHA进入细胞后，UA含量显著性下降，载DHA肌球蛋白胶束组的UA含量最低，抑制尿酸过剩的效果最好。4.3.11细胞自噬体形成结果细胞自噬体形成结果图4-11所示。图4-11细胞自噬结果图（400×）Fig.4-11Resultsofautophagy（400×）（A：对照组；B：模型组；C：DHA；D：卵清蛋白胶束；E：载DHA卵清蛋白胶束；F：肌球蛋白胶束；G：载DHA肌球蛋白胶束；H：大豆球蛋白胶束；I：载DHA大豆球蛋白胶束；J：β-乳球蛋白胶束；K：载DHA乳球蛋白胶束）细胞内的脂滴也被认为是自噬的底物，细胞自噬是通过作用脂滴达到避免细胞内脂质超载的目的。MDC是一种特异性荧光胺基探针，能直接抑制囊泡转运，标记自噬体。由图4-11可知，对比空白组，模型组的蓝色荧光明显减少，在添加DHA和载DHA蛋白胶束后蓝色荧光有所增多，说明细胞自噬受到了棕榈酸的抑制，自噬体减少。四组蛋白胶束的荧光信号强度与模型组几乎无差别，四组载DHA蛋白胶束的信号强度得到增强，说明蛋白胶束本身不具有促进细胞自噬的能力，通过运转DHA，使DHA发挥作用，使自噬体增多，其中载DHA肌球蛋白胶束的荧光信号最强。4.3.12细胞免疫荧光染色检测HepG2细胞内LC3-Ⅱ表达水平细胞LC3-Ⅱ表达水平图4-12所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]扫频超声处理时间对β-乳球蛋白酶解制备多肽抗氧化活性的影响[J]. 梁秋芳,张熙,任晓锋,侯婷,瞿志超,冯洛,马海乐. 中国食品学报. 2020(04)
[2]DHA稳态化技术研究进展[J]. 刘佳炜,王旭,曹雁平,许朵霞. 食品工业科技. 2019(07)
[3]两种油脂水平下DHA添加对鲤生长及脂质代谢的影响[J]. 周继术,曹艳姿,吉红,于海波. 水生生物学报. 2018(01)
[4]富集DHA鸡蛋的研究进展[J]. 付兴周,路志芳,申海燕,冯现明,孙长松. 中国家禽. 2016(09)
[5]姜黄素对棕榈酸诱导HepG2细胞炎症及纤维化通路的影响[J]. 高彩霞,邵琳琳,冯文焕,朱大龙,沈山梅,毕艳. 江苏医药. 2016(07)
[6]大豆球蛋白及β-伴大豆球蛋白的研究进展[J]. 彭易柱. 饲料博览. 2014(12)
[7]微胶囊技术在水产养殖中的应用[J]. 付石军,郭时金,霍芳,张志美,沈志强. 饲料与畜牧. 2014(02)
[8]ω-3多不饱和脂肪酸对肝癌细胞的影响研究现状[J]. 孙思楠,李建生,荚卫东,马金良. 实用肝脏病杂志. 2012(06)
[9]不同酶切方式对乳清蛋白疏水性和乳化性的影响[J]. 韩仁娇,刘春红,冯志彪. 中国乳品工业. 2011(10)
[10]两亲性肽自组装纳米结构及其应用[J]. 唐丽丽,何道航. 广东化工. 2011(01)
博士论文
[1]大豆球蛋白酶解物中巯基肽的分布、制备及其与重金属离子作用的研究[D]. 丁秀臻.江南大学 2016
[2]多糖对大豆蛋白的修饰及其界面、乳化和凝胶性质的研究[D]. 张晋博.华南理工大学 2013
[3]Cr（Ⅵ）诱导肝细胞线粒体呼吸链功能紊乱在细胞凋亡与早衰中的分子机制[D]. 肖芳.中南大学 2012
[4]酶解大豆蛋白功能特性、结构及在肉糜中的应用[D]. 黄行健.华中农业大学 2010
[5]二十二碳六烯酸和亚油酸对牛体内共轭亚油酸前体物累积的影响[D]. 刘仕军.中国农业科学院 2008
[6]鸡蛋卵白蛋白酶解物抗氧化肽研究[D]. 徐明生.陕西师范大学 2006
硕士论文
[1]芹菜素降低棕榈酸诱导的HepG2细胞脂质积聚的机制[D]. 孟卓群.吉林大学 2019
[2]高产DHA裂殖壶菌的诱变选育及转录组分析[D]. 龚定芳.江南大学 2019
[3]不同油脂配比饲料对中华绒螯蟹脂类代谢影响的初步研究[D]. 魏帮鸿.上海海洋大学 2018
[4]EPA、DHA抑制小鼠溃疡性结肠炎作用的比较研究[D]. 张壮威.宁波大学 2018
[5]DHA-PC对HepG2细胞内甘油三酯沉积的影响及机制[D]. 孙鹤.福建农林大学 2018
[6]DHA功能因子输送体系及其稳定性研究[D]. 王博.天津科技大学 2018
[7]阿霉素激发人源α-螺旋肽自组装载药纳米的构建[D]. 赵峰峰.东南大学 2017
[8]二十二碳六烯酸诱导细胞自噬减轻缺血性脑卒中神经损伤[D]. 孙而艺.贵州医科大学 2017
[9]ω-3多不饱和脂肪酸调节肠道菌群平衡缓解NAFLD机制[D]. 田宇.武汉轻工大学 2016
[10]DHA调控Kupffer细胞极化途径缓解NAFLD炎性损伤[D]. 翟莹.武汉轻工大学 2016
本文编号：3295420
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
蛋白封装DHA胶束的形态（80K）
油红O染色结果图（40×）
4蛋白自组装DHA胶束的降脂活性的研究34酸水平升高，导致通风、心血管疾病的发生（KayserB，VergesS，2013）。由图4-10可知，棕榈酸刺激下，细胞内UA水平明显升高，对照组与模型组有显著性差异（P<0.05），四组蛋白胶束的UA含量与模型组均无显著性差异，四组载DHA蛋白胶束与DHA组均有显著性差异，表明DHA进入细胞后，UA含量显著性下降，载DHA肌球蛋白胶束组的UA含量最低，抑制尿酸过剩的效果最好。4.3.11细胞自噬体形成结果细胞自噬体形成结果图4-11所示。图4-11细胞自噬结果图（400×）Fig.4-11Resultsofautophagy（400×）（A：对照组；B：模型组；C：DHA；D：卵清蛋白胶束；E：载DHA卵清蛋白胶束；F：肌球蛋白胶束；G：载DHA肌球蛋白胶束；H：大豆球蛋白胶束；I：载DHA大豆球蛋白胶束；J：β-乳球蛋白胶束；K：载DHA乳球蛋白胶束）细胞内的脂滴也被认为是自噬的底物，细胞自噬是通过作用脂滴达到避免细胞内脂质超载的目的。MDC是一种特异性荧光胺基探针，能直接抑制囊泡转运，标记自噬体。由图4-11可知，对比空白组，模型组的蓝色荧光明显减少，在添加DHA和载DHA蛋白胶束后蓝色荧光有所增多，说明细胞自噬受到了棕榈酸的抑制，自噬体减少。四组蛋白胶束的荧光信号强度与模型组几乎无差别，四组载DHA蛋白胶束的信号强度得到增强，说明蛋白胶束本身不具有促进细胞自噬的能力，通过运转DHA，使DHA发挥作用，使自噬体增多，其中载DHA肌球蛋白胶束的荧光信号最强。4.3.12细胞免疫荧光染色检测HepG2细胞内LC3-Ⅱ表达水平细胞LC3-Ⅱ表达水平图4-12所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]扫频超声处理时间对β-乳球蛋白酶解制备多肽抗氧化活性的影响[J]. 梁秋芳,张熙,任晓锋,侯婷,瞿志超,冯洛,马海乐. 中国食品学报. 2020(04)
[2]DHA稳态化技术研究进展[J]. 刘佳炜,王旭,曹雁平,许朵霞. 食品工业科技. 2019(07)
[3]两种油脂水平下DHA添加对鲤生长及脂质代谢的影响[J]. 周继术,曹艳姿,吉红,于海波. 水生生物学报. 2018(01)
[4]富集DHA鸡蛋的研究进展[J]. 付兴周,路志芳,申海燕,冯现明,孙长松. 中国家禽. 2016(09)
[5]姜黄素对棕榈酸诱导HepG2细胞炎症及纤维化通路的影响[J]. 高彩霞,邵琳琳,冯文焕,朱大龙,沈山梅,毕艳. 江苏医药. 2016(07)
[6]大豆球蛋白及β-伴大豆球蛋白的研究进展[J]. 彭易柱. 饲料博览. 2014(12)
[7]微胶囊技术在水产养殖中的应用[J]. 付石军,郭时金,霍芳,张志美,沈志强. 饲料与畜牧. 2014(02)
[8]ω-3多不饱和脂肪酸对肝癌细胞的影响研究现状[J]. 孙思楠,李建生,荚卫东,马金良. 实用肝脏病杂志. 2012(06)
[9]不同酶切方式对乳清蛋白疏水性和乳化性的影响[J]. 韩仁娇,刘春红,冯志彪. 中国乳品工业. 2011(10)
[10]两亲性肽自组装纳米结构及其应用[J]. 唐丽丽,何道航. 广东化工. 2011(01)
博士论文
[1]大豆球蛋白酶解物中巯基肽的分布、制备及其与重金属离子作用的研究[D]. 丁秀臻.江南大学 2016
[2]多糖对大豆蛋白的修饰及其界面、乳化和凝胶性质的研究[D]. 张晋博.华南理工大学 2013
[3]Cr（Ⅵ）诱导肝细胞线粒体呼吸链功能紊乱在细胞凋亡与早衰中的分子机制[D]. 肖芳.中南大学 2012
[4]酶解大豆蛋白功能特性、结构及在肉糜中的应用[D]. 黄行健.华中农业大学 2010
[5]二十二碳六烯酸和亚油酸对牛体内共轭亚油酸前体物累积的影响[D]. 刘仕军.中国农业科学院 2008
[6]鸡蛋卵白蛋白酶解物抗氧化肽研究[D]. 徐明生.陕西师范大学 2006
硕士论文
[1]芹菜素降低棕榈酸诱导的HepG2细胞脂质积聚的机制[D]. 孟卓群.吉林大学 2019
[2]高产DHA裂殖壶菌的诱变选育及转录组分析[D]. 龚定芳.江南大学 2019
[3]不同油脂配比饲料对中华绒螯蟹脂类代谢影响的初步研究[D]. 魏帮鸿.上海海洋大学 2018
[4]EPA、DHA抑制小鼠溃疡性结肠炎作用的比较研究[D]. 张壮威.宁波大学 2018
[5]DHA-PC对HepG2细胞内甘油三酯沉积的影响及机制[D]. 孙鹤.福建农林大学 2018
[6]DHA功能因子输送体系及其稳定性研究[D]. 王博.天津科技大学 2018
[7]阿霉素激发人源α-螺旋肽自组装载药纳米的构建[D]. 赵峰峰.东南大学 2017
[8]二十二碳六烯酸诱导细胞自噬减轻缺血性脑卒中神经损伤[D]. 孙而艺.贵州医科大学 2017
[9]ω-3多不饱和脂肪酸调节肠道菌群平衡缓解NAFLD机制[D]. 田宇.武汉轻工大学 2016
[10]DHA调控Kupffer细胞极化途径缓解NAFLD炎性损伤[D]. 翟莹.武汉轻工大学 2016
本文编号：3295420
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