一种产脂肪酶的乳酸菌食品添加剂的开发
发布时间：2021-10-09 10:25
乳酸菌（Lactic acid bacteria）是人们公认的食品级微生物。其被广泛应用于食品生产、医学工程、家畜养殖和发酵产业等。微生物制剂属于活性益生菌产品,能够改善生物体内生态平衡,提升主体的健康水准。本实验选择基因工程的方法来构建一种能够过量表达脂肪酶的乳酸杆菌工程菌W1/p MG36e-lipase-nis I。这种乳酸菌不包含抗生素等选择性标记标记,完全符合食品级别安全规范。实验扩增脂肪酶基因（lipase）是以植物乳酸杆菌W1基因组为模板,在质粒p ET30a中插入该脂肪酶基因（lipase）,共同构建得到大肠杆菌表达载体p ET30a-lipase,再用购买的含有乳链菌肽抗性基因（nis I）的质粒p ET30a为模板进行nis I扩增,并将该基因插入到表达载体p MG36e-lipase中,将红霉素标记替换掉,成功得到乳酸菌表达载体p MG36e-lipase-nis I,运用电转化法转化将其转化到W1中,进一步构建出菌株W1/p MG36e-lipase-nis I,检测其在Nisin环境中生存及表达能力。结果表明,W1/p MG36e-lipase-nis I在乳...
【文章来源】：齐鲁工业大学山东省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
nisZ的分子结构
第1章绪论10如图1-2（a）、（b）为2种灭菌原理图。一种是乳链菌肽通过微mol浓度创造出非靶向目标（即无脂质II）介导的通路，称为“桶-板模型”或“插入模型”。另外一种是乳链菌肽通过摩尔浓度，使细菌细胞膜的双层脂质II形成通路，与此同时，乳链菌肽与脂质II账户合并，起到抑制肽聚糖合成的作用，称之为“楔型模型”。图1-2乳链菌肽作用机制模型[54]Fig.1-2TransactionalmodelsofNisin（a）为“桶-板模型”；（b）为“楔型模型”(a)Is"bucketplatemodel";（b）is"wedgemodel"1.3.3乳链菌肽的转录基因微生物合成乳链菌肤的过程中主要有11个基因参与。如图1-3，是乳链菌肽基因簇，其基因簇按顺序排列在乳链菌肽-蔗糖转座子上，位于DNA左端约14kb的片段上，次序是nisA/Z、nisT、nisC、nisI、nisP、nisR、nisK、nisF、nisE、nisG。其中nisA/Z负责完成乳链菌肽前体的编码。nisB负责翻译过程并完成修饰。nisC起催化作用，脱去水残基和半胱氨酸，最终得到硫醚键。nisT和nisP起输出和激活作用。nisI/FEG涉及菌体自身免疫力有关。nisI基因主要是对乳链菌肽产生的抗性作用，乳链菌肽基因与nisFEG共同作用时，可以达到最强的免疫作用。nisR和nisK是双组分调节基因。图1-3乳链菌肽基因簇的组成[54]Fig.1-3TheentireNisingene表示：乳链菌肽诱导的启动子；表示：组成启动子；○表示：终止子1.3.4乳链菌肽标记基因的抗性筛选
第1章绪论10如图1-2（a）、（b）为2种灭菌原理图。一种是乳链菌肽通过微mol浓度创造出非靶向目标（即无脂质II）介导的通路，称为“桶-板模型”或“插入模型”。另外一种是乳链菌肽通过摩尔浓度，使细菌细胞膜的双层脂质II形成通路，与此同时，乳链菌肽与脂质II账户合并，起到抑制肽聚糖合成的作用，称之为“楔型模型”。图1-2乳链菌肽作用机制模型[54]Fig.1-2TransactionalmodelsofNisin（a）为“桶-板模型”；（b）为“楔型模型”(a)Is"bucketplatemodel";（b）is"wedgemodel"1.3.3乳链菌肽的转录基因微生物合成乳链菌肤的过程中主要有11个基因参与。如图1-3，是乳链菌肽基因簇，其基因簇按顺序排列在乳链菌肽-蔗糖转座子上，位于DNA左端约14kb的片段上，次序是nisA/Z、nisT、nisC、nisI、nisP、nisR、nisK、nisF、nisE、nisG。其中nisA/Z负责完成乳链菌肽前体的编码。nisB负责翻译过程并完成修饰。nisC起催化作用，脱去水残基和半胱氨酸，最终得到硫醚键。nisT和nisP起输出和激活作用。nisI/FEG涉及菌体自身免疫力有关。nisI基因主要是对乳链菌肽产生的抗性作用，乳链菌肽基因与nisFEG共同作用时，可以达到最强的免疫作用。nisR和nisK是双组分调节基因。图1-3乳链菌肽基因簇的组成[54]Fig.1-3TheentireNisingene表示：乳链菌肽诱导的启动子；表示：组成启动子；○表示：终止子1.3.4乳链菌肽标记基因的抗性筛选
【参考文献】：
期刊论文
[1]酶制剂和乳酸菌对秸秆微贮饲料质量及瘤胃降解率的影响[J]. 曾辉,邱玉朗,李林,陈群. 中国畜牧杂志. 2018(11)
[2]乳酸菌细菌素对小鼠肠道菌群结构及代谢产物的影响[J]. 俞赟霞,王刚,赵建新,张灏,陈卫. 食品与发酵工业. 2018(07)
[3]产脂肪酶菌株的常压室温等离子体诱变及高通量筛选方法的建立[J]. 曹茜,冯凤琴. 中国粮油学报. 2016(02)
[4]浅述乳酸菌制剂在畜禽生产中的应用[J]. 徐婷婷. 现代畜牧科技. 2016(01)
[5]乳酸菌及其发酵饲料在动物生产中的应用[J]. 王芳芳,刁华杰,夏九龙,武洪志,刁新平. 饲料研究. 2016(01)
[6]乳酸菌功能作用及其在生产中的应用[J]. 张晓黎,吴兴壮,张华. 农业工程技术(农产品加工业). 2015(05)
[7]新疆酸奶中高产蛋白酶与产脂肪酶乳酸菌的筛选[J]. 何捷,曾小群,吕鸣春,毛仲瑄,王象林,潘道东. 食品科学. 2015(17)
[8]益生乳酸菌在发酵果蔬饮品开发上的应用[J]. 廖雪义,郭丽琼,林俊芳,邱灵燕. 食品工业. 2014(07)
[9]微生物脂肪酶在动物饲料中的应用探讨[J]. 陈枫,韦仕航. 当代畜牧. 2014(17)
[10]乳酸菌的生理功能及在饲料发酵中的应用[J]. 左志芳,谢红兵,刘长忠,崔艳红,王元元,刘兴友. 河南科技学院学报(自然科学版). 2014(02)
博士论文
[1]Proteus Vulgaris T6脂肪酶分子定向进化研究[D]. 房耀维.南京农业大学 2007
硕士论文
[1]脂肪酶MAS1的结构与耐热及底物选择性关系的研究[D]. 赵泽鑫.华南理工大学 2017
[2]产脂肪酶芽孢杆菌的分离及在鸡饲喂上的应用[D]. 郭威.河北农业大学 2014
[3]多元电解质对有机相中脂肪酶拆分炔戊醇的激活效应[D]. 崔丽娟.浙江大学 2014
[4]耐高温酸性脂肪酶产生菌的选育及其酶学特性研究[D]. 张开平.河南工业大学 2013
[5]发酵饲料对肉鸭生长性能及回肠菌群的影响[D]. 尹鹏鹏.四川农业大学 2012
[6]脂肪酶和胰蛋白酶的固定化及共固定化研究[D]. 刘自琴.华南理工大学 2012
[7]乳酸菌表达载体的构建及初步应用[D]. 代伟丽.天津科技大学 2012
[8]极地适冷菌Psychrobacter sp.G低温脂肪酶基因克隆与异源表达[D]. 崔硕硕.国家海洋局第一海洋研究所 2011
[9]毕赤酵母翻译延伸因子1-α启动子在南极假丝酵母脂肪酶B表达上的应用[D]. 袁围.华南理工大学 2011
[10]袋装混菌发酵全价饲料的研究[D]. 吕锋.安徽农业大学 2010
本文编号：3426183
【文章来源】：齐鲁工业大学山东省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
nisZ的分子结构
第1章绪论10如图1-2（a）、（b）为2种灭菌原理图。一种是乳链菌肽通过微mol浓度创造出非靶向目标（即无脂质II）介导的通路，称为“桶-板模型”或“插入模型”。另外一种是乳链菌肽通过摩尔浓度，使细菌细胞膜的双层脂质II形成通路，与此同时，乳链菌肽与脂质II账户合并，起到抑制肽聚糖合成的作用，称之为“楔型模型”。图1-2乳链菌肽作用机制模型[54]Fig.1-2TransactionalmodelsofNisin（a）为“桶-板模型”；（b）为“楔型模型”(a)Is"bucketplatemodel";（b）is"wedgemodel"1.3.3乳链菌肽的转录基因微生物合成乳链菌肤的过程中主要有11个基因参与。如图1-3，是乳链菌肽基因簇，其基因簇按顺序排列在乳链菌肽-蔗糖转座子上，位于DNA左端约14kb的片段上，次序是nisA/Z、nisT、nisC、nisI、nisP、nisR、nisK、nisF、nisE、nisG。其中nisA/Z负责完成乳链菌肽前体的编码。nisB负责翻译过程并完成修饰。nisC起催化作用，脱去水残基和半胱氨酸，最终得到硫醚键。nisT和nisP起输出和激活作用。nisI/FEG涉及菌体自身免疫力有关。nisI基因主要是对乳链菌肽产生的抗性作用，乳链菌肽基因与nisFEG共同作用时，可以达到最强的免疫作用。nisR和nisK是双组分调节基因。图1-3乳链菌肽基因簇的组成[54]Fig.1-3TheentireNisingene表示：乳链菌肽诱导的启动子；表示：组成启动子；○表示：终止子1.3.4乳链菌肽标记基因的抗性筛选
第1章绪论10如图1-2（a）、（b）为2种灭菌原理图。一种是乳链菌肽通过微mol浓度创造出非靶向目标（即无脂质II）介导的通路，称为“桶-板模型”或“插入模型”。另外一种是乳链菌肽通过摩尔浓度，使细菌细胞膜的双层脂质II形成通路，与此同时，乳链菌肽与脂质II账户合并，起到抑制肽聚糖合成的作用，称之为“楔型模型”。图1-2乳链菌肽作用机制模型[54]Fig.1-2TransactionalmodelsofNisin（a）为“桶-板模型”；（b）为“楔型模型”(a)Is"bucketplatemodel";（b）is"wedgemodel"1.3.3乳链菌肽的转录基因微生物合成乳链菌肤的过程中主要有11个基因参与。如图1-3，是乳链菌肽基因簇，其基因簇按顺序排列在乳链菌肽-蔗糖转座子上，位于DNA左端约14kb的片段上，次序是nisA/Z、nisT、nisC、nisI、nisP、nisR、nisK、nisF、nisE、nisG。其中nisA/Z负责完成乳链菌肽前体的编码。nisB负责翻译过程并完成修饰。nisC起催化作用，脱去水残基和半胱氨酸，最终得到硫醚键。nisT和nisP起输出和激活作用。nisI/FEG涉及菌体自身免疫力有关。nisI基因主要是对乳链菌肽产生的抗性作用，乳链菌肽基因与nisFEG共同作用时，可以达到最强的免疫作用。nisR和nisK是双组分调节基因。图1-3乳链菌肽基因簇的组成[54]Fig.1-3TheentireNisingene表示：乳链菌肽诱导的启动子；表示：组成启动子；○表示：终止子1.3.4乳链菌肽标记基因的抗性筛选
【参考文献】：
期刊论文
[1]酶制剂和乳酸菌对秸秆微贮饲料质量及瘤胃降解率的影响[J]. 曾辉,邱玉朗,李林,陈群. 中国畜牧杂志. 2018(11)
[2]乳酸菌细菌素对小鼠肠道菌群结构及代谢产物的影响[J]. 俞赟霞,王刚,赵建新,张灏,陈卫. 食品与发酵工业. 2018(07)
[3]产脂肪酶菌株的常压室温等离子体诱变及高通量筛选方法的建立[J]. 曹茜,冯凤琴. 中国粮油学报. 2016(02)
[4]浅述乳酸菌制剂在畜禽生产中的应用[J]. 徐婷婷. 现代畜牧科技. 2016(01)
[5]乳酸菌及其发酵饲料在动物生产中的应用[J]. 王芳芳,刁华杰,夏九龙,武洪志,刁新平. 饲料研究. 2016(01)
[6]乳酸菌功能作用及其在生产中的应用[J]. 张晓黎,吴兴壮,张华. 农业工程技术(农产品加工业). 2015(05)
[7]新疆酸奶中高产蛋白酶与产脂肪酶乳酸菌的筛选[J]. 何捷,曾小群,吕鸣春,毛仲瑄,王象林,潘道东. 食品科学. 2015(17)
[8]益生乳酸菌在发酵果蔬饮品开发上的应用[J]. 廖雪义,郭丽琼,林俊芳,邱灵燕. 食品工业. 2014(07)
[9]微生物脂肪酶在动物饲料中的应用探讨[J]. 陈枫,韦仕航. 当代畜牧. 2014(17)
[10]乳酸菌的生理功能及在饲料发酵中的应用[J]. 左志芳,谢红兵,刘长忠,崔艳红,王元元,刘兴友. 河南科技学院学报(自然科学版). 2014(02)
博士论文
[1]Proteus Vulgaris T6脂肪酶分子定向进化研究[D]. 房耀维.南京农业大学 2007
硕士论文
[1]脂肪酶MAS1的结构与耐热及底物选择性关系的研究[D]. 赵泽鑫.华南理工大学 2017
[2]产脂肪酶芽孢杆菌的分离及在鸡饲喂上的应用[D]. 郭威.河北农业大学 2014
[3]多元电解质对有机相中脂肪酶拆分炔戊醇的激活效应[D]. 崔丽娟.浙江大学 2014
[4]耐高温酸性脂肪酶产生菌的选育及其酶学特性研究[D]. 张开平.河南工业大学 2013
[5]发酵饲料对肉鸭生长性能及回肠菌群的影响[D]. 尹鹏鹏.四川农业大学 2012
[6]脂肪酶和胰蛋白酶的固定化及共固定化研究[D]. 刘自琴.华南理工大学 2012
[7]乳酸菌表达载体的构建及初步应用[D]. 代伟丽.天津科技大学 2012
[8]极地适冷菌Psychrobacter sp.G低温脂肪酶基因克隆与异源表达[D]. 崔硕硕.国家海洋局第一海洋研究所 2011
[9]毕赤酵母翻译延伸因子1-α启动子在南极假丝酵母脂肪酶B表达上的应用[D]. 袁围.华南理工大学 2011
[10]袋装混菌发酵全价饲料的研究[D]. 吕锋.安徽农业大学 2010
本文编号：3426183
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