T-2毒素单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的研究

发布时间：2021-12-01 19:04

　　T-2毒素是由多种真菌产生的一种毒性很强的单端孢霉烯族毒素,比较广泛存在于谷物及饲料中。若人和动物食用被T-2毒素污染的谷物或饲料,将会对人类和动物的健康构成潜在危害。免疫分析方法具有灵敏度高、特异性强及操作简便等特点,可用于大规模、快速检测T-2毒素的残留。本论文采用杂交瘤细胞融合法制备T-2毒素单克隆抗体,通过对反应条件进行优化,建立了酶联免疫吸附分析法、化学发光酶联免疫吸附分析法及免疫亲和柱-高效液相色谱法,并对小麦和玉米等粮谷类食品中T-2毒素进行检测分析。1.T-2毒素单克隆抗体的制备用人工合成的免疫抗原T-2-BSA免疫Balb/c小鼠,采用电融合法将骨髓瘤细胞SP2/0与小鼠脾细胞进行融合,成功获得两株分泌T-2毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞3B2、8C3,其中8C3的竞争效果更好,所以选杂交瘤细胞8C3制备T-2毒素单克隆抗体。采用辛酸-硫酸铵法和蛋白G柱法纯化单抗腹水,测其浓度为3.58 mg/m L。2.酶联免疫吸附分析法的建立对酶联免疫吸附分析法反应体系中的抗原包被浓度、抗体稀释比例、酶标二抗稀释比例、甲醇浓度、离子强度、p H等影响因素进行优化,确定了T-2抗原和T...

【文章来源】： 江西科技师范大学江西省

【文章页数】：73 页

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 绪论
    1.1 T-2毒素的概述
        1.1.1 T-2毒素的理化性质
        1.1.2 T-2毒素的毒性作用
    1.2 T-2毒素的相关法规
    1.3 T-2毒素的来源
    1.4 T-2毒素分析检测方法的研究
        1.4.1 生物检测方法
        1.4.2 薄层色谱法
        1.4.3 高效液相色谱法及其联用技术
        1.4.4 气相色谱及其联用技术
        1.4.5 免疫学检测方法
    1.5 本课题的研究目的与主要内容
第2章 T-2毒素单克隆抗体的制备
    2.1 实验试剂与仪器
        2.1.1 实验主要试剂
        2.1.2 实验主要仪器
        2.1.3 实验所用溶液的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 小鼠的免疫
        2.2.2 血清效价的测定
        2.2.3 血清特异性的测定
    2.3 T-2毒素单克隆抗体制备
        2.3.1 骨髓瘤细胞的准备
        2.3.2 小鼠脾脏细胞的准备
        2.3.3 细胞融合
        2.3.4 饲养细胞的制备
        2.3.5 融合细胞的培养
        2.3.6 杂交瘤细胞的筛选
        2.3.7 杂交瘤细胞的克隆化
        2.3.8 杂交瘤细胞的冻存
        2.3.9 杂交瘤细胞的复苏
        2.3.10 单克隆抗体的大量生产
        2.3.11 T-2毒素单克隆抗体腹水的纯化
    2.4 实验结果与分析
        2.4.1 免疫小鼠血清效价的测定结果
        2.4.2 杂交瘤细胞的筛选及克隆化
        2.4.3 单克隆抗体蛋白含量的确定
    2.5 本章小结
第3章 酶联免疫吸附分析法检测T-2毒素
    3.1 实验试剂与仪器
        3.1.1 实验主要试剂
        3.1.2 实验主要仪器
        3.1.3 实验所用溶液的配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 最佳抗原包被浓度的确定
        3.2.2 间接ELISA竞争操作步骤
        3.2.3 ELISA反应体系的优化
        3.2.4 标准曲线的建立
        3.2.5 样品的加标回收
    3.3 实验结果与分析
        3.3.1 抗原包被浓度的确定
        3.3.2 抗体稀释比例的确定
        3.3.3 酶标二抗稀释比例的确定
        3.3.4 甲醇浓度的确定
        3.3.5 pH的确定
        3.3.6 离子强度的确定
        3.3.7 标准工作曲线的建立
        3.3.8 样品的加标回收
    3.4 本章小结
第4章 化学发光酶联免疫吸附分析法测定T-2毒素
    4.1 实验试剂与仪器
        4.1.1 实验主要试剂
        4.1.2 实验主要仪器
        4.1.3 实验所用溶液的配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 抗原包被浓度的确定
        4.2.2 间接ELISA竞争操作步骤
        4.2.3 CLEIA反应体系优化
        4.2.4 标准曲线的建立
        4.2.5 样品的加标回收
    4.3 实验结果与分析
        4.3.1 抗原包被浓度的确定
        4.3.2 抗体稀释比的确定
        4.3.3 酶标二抗稀释比的确定
        4.3.4 甲醇浓度优化结果
        4.3.5 pH优化结果
        4.3.6 离子强度优化结果
        4.3.7 标准工作曲线的建立
        4.3.8 样品的加标回收
    4.4 本章小结
第5章 T-2毒素免疫亲和柱-高效液相色谱法的建立
    5.1 实验试剂与仪器
        5.1.1 实验主要试剂
        5.1.2 实验主要仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 色谱条件
        5.2.2 实验所用溶液的配制
        5.2.3 样品的净化与洗脱
        5.2.4 衍生化
        5.2.5 样品的加标回收
        5.2.6 实际样品的检测
    5.3 实验结果和分析
        5.3.1 标准曲线的绘制
        5.3.2 样品的加标回收
        5.3.3 ELISA、C LEIA与 HPLC的方法学比较
        5.3.4 实际样品中T-2毒素含量的检测
    5.4 本章小结
第6章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 展望
参考文献
攻读学位期间的研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]T-2毒素对BALB/c小鼠的毒性作用和对HL-7702细胞的毒性效应机制研究[D]. 陈慧英.上海海洋大学 2015
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[3]T-2毒素多克隆抗体的制备及其化学发光免疫检测的初步研究[D]. 徐娟.华中农业大学 2010
[4]T-2毒素对长沙黄鸡免疫功能的毒性影响及其控毒试验研究[D]. 袁莉芸.湖南农业大学 2006



本文编号：3526886