亚临界水辅助酶解鲍鱼内脏提取物及其体外活性的研究
发布时间：2022-01-13 03:06
本研究以鲍鱼内脏为原料,使用亚临界水萃取并辅助酶解制备鲍鱼内脏酶解物,并对鲍鱼内脏亚临界水萃取物（AVS）及其辅助酶解物（AVSEs）的理化性质及其抗氧化活性进行测定。之后,本研究通过RAW264.7细胞对AVS和AVSEs的体外免疫活性进行测定。最后,本研究使用Caco-2细胞模型对AVS和AVSEs的体外转运吸收情况及转运吸收后的抗氧化活性进行测定。首先,本研究使用亚临界水分别辅助木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶酶解制备水解物。对其基本成分进行测定后结果表明,AVS中蛋白质和总糖含量分别为38.33%和24.36%。当亚临界水萃取物被进一步酶解时,不论采用哪一种酶,其蛋白质含量增加而总糖含量减少。氨基酸主要由丙氨酸、甘氨酸和天冬氨酸组成。亚临界水萃取物的Fe3+还原能力、DPPH、ABTS、DMPD和OH自由基清除活性的IC50值分别为2.93、1.48、1.61、3.72和5.51mg/mL。在经过进一步酶解后,IC50值均出现下降。其中,使用木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶酶解后得到的辅助酶解物DMPD和OH...
【文章来源】：集美大学福建省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
亚临界水萃取物及其辅助酶解物的分子量分布
硕士学位论文 亚临界水辅助酶解鲍鱼内脏提取物及其体外活数据统计与分析得数据采用 SPSS 17.0 软件(SPSS Inc, Chicago, IL, USA)进行方差分析(ANO验方法为 Duncan 多重检验，显著性水平为 0.05。使用 ELISAcalc 进行 TNF-线的绘制，拟合模型选用 logistic 曲线（四参数）。使用 Microsoft Office Eosoft Office Visio 2013 进行作图。果与讨论小鼠巨噬细胞 RAW264.7 细胞生长曲线本研究中，对 RAW264.7 细胞的生长曲线进行绘制，结果如图 3-1 所示。由噬细胞 RAW264.7 在第 2 天至第 5 天处于对数生长期。因此，采用培养 2 期的小鼠巨噬细胞 RAW264.7 进行后续实验。
蛋白酶、胰蛋白酶和α-糜蛋白酶水解蛋白得到了三种蛋白水解物，发现香鱼蛋白及其水物在 0.2 mg/mL 时对 RAW264.7 细胞增殖活性具有促进作用[69]384。鲍鱼内脏亚临界水萃物及其辅助酶解物对 RAW264.7 细胞增殖活性的促进作用可能是由于经过亚临界水萃取及木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶酶解后，所得到的氨基酸为 RAW264.7 细胞增所必需的氨基酸。然而，使用不同浓度的AVSE-B 作用于RAW264.7细胞时，发现AVSE-B浓度低于 1.00 mg/mL 时对细胞增殖活性未表现显著性作用，且在浓度较高时对细胞会产显著性的抑制作用(p<0.05)。因此，当 AVS 和 AVSEs 浓度低于 0.50 mg/mL 时，对W264.7 细胞未表现出细胞毒性作用，该结果与 Meram 等人的研究结果相似，蛋黄球蛋及其酶解物浓度低于 1600 μg/mL 时对 RAW264.7 细胞未表现出显著性细胞毒性[106]452。除此之外，在所有 AVSE 中，AVSE-N 在 0.13 mg/mL 和 0.25 mg/mL 浓度下，对细胞胞活性的促进作用接近 37%。因此，AVSE-N 可作为 RAW264.7 细胞的增殖刺激因子。次是 AVSE-P 和 AVSE-F，在 0.13-0.50 mg/mL 的浓度下，AVSE-P 和 AVSE-F 分别能促细胞增殖 10%以上。因此，选用 0.13 mg/mL 和 0.25 mg/mL 的 AVS 和 AVSE 用于进一步实验。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鲍内脏蛋白肽抗氧化和免疫调节活性[J]. 何传波,邵杰,魏好程,熊何健,吴国宏,马英,吴建勇. 食品科学. 2018(05)
[2]鲍内脏肽粉的抗氧化活性研究[J]. 吴靖娜. 海南大学学报(自然科学版). 2015(02)
[3]超滤膜分离鲍鱼内脏酶解物及其体外抗氧化活性的研究[J]. 叶燕军,陈俊,翁武银. 现代食品科技. 2015(05)
[4]鲨鱼皮胶原与罗非鱼皮胶原的理化性质及酶解特性研究[J]. 王宝周,张萌,陈俊,翁武银. 食品工业科技. 2014(16)
[5]提取pH和温度对罗非鱼（Tilapia zillii）鱼鳞明胶特性的影响[J]. 郑惠彬,翁武银,苏文金,郝更新. 海洋与湖沼. 2013(05)
[6]鲍鱼内脏多糖的体外抗肿瘤和免疫调节活性研究[J]. 王莅莎,朱蓓薇,孙黎明,李冬梅. 大连工业大学学报. 2008(04)
[7]抗氧化活性检测方法的研究进展[J]. 刘志东,郭本恒,王荫榆. 天然产物研究与开发. 2008(03)
[8]酸水解蛋白质调味液安全生产工艺研究[J]. 李祥,李运涛,魏尚洲. 中国酿造. 2004(03)
本文编号：3585943
【文章来源】：集美大学福建省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
亚临界水萃取物及其辅助酶解物的分子量分布
硕士学位论文 亚临界水辅助酶解鲍鱼内脏提取物及其体外活数据统计与分析得数据采用 SPSS 17.0 软件(SPSS Inc, Chicago, IL, USA)进行方差分析(ANO验方法为 Duncan 多重检验，显著性水平为 0.05。使用 ELISAcalc 进行 TNF-线的绘制，拟合模型选用 logistic 曲线（四参数）。使用 Microsoft Office Eosoft Office Visio 2013 进行作图。果与讨论小鼠巨噬细胞 RAW264.7 细胞生长曲线本研究中，对 RAW264.7 细胞的生长曲线进行绘制，结果如图 3-1 所示。由噬细胞 RAW264.7 在第 2 天至第 5 天处于对数生长期。因此，采用培养 2 期的小鼠巨噬细胞 RAW264.7 进行后续实验。
蛋白酶、胰蛋白酶和α-糜蛋白酶水解蛋白得到了三种蛋白水解物，发现香鱼蛋白及其水物在 0.2 mg/mL 时对 RAW264.7 细胞增殖活性具有促进作用[69]384。鲍鱼内脏亚临界水萃物及其辅助酶解物对 RAW264.7 细胞增殖活性的促进作用可能是由于经过亚临界水萃取及木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶酶解后，所得到的氨基酸为 RAW264.7 细胞增所必需的氨基酸。然而，使用不同浓度的AVSE-B 作用于RAW264.7细胞时，发现AVSE-B浓度低于 1.00 mg/mL 时对细胞增殖活性未表现显著性作用，且在浓度较高时对细胞会产显著性的抑制作用(p<0.05)。因此，当 AVS 和 AVSEs 浓度低于 0.50 mg/mL 时，对W264.7 细胞未表现出细胞毒性作用，该结果与 Meram 等人的研究结果相似，蛋黄球蛋及其酶解物浓度低于 1600 μg/mL 时对 RAW264.7 细胞未表现出显著性细胞毒性[106]452。除此之外，在所有 AVSE 中，AVSE-N 在 0.13 mg/mL 和 0.25 mg/mL 浓度下，对细胞胞活性的促进作用接近 37%。因此，AVSE-N 可作为 RAW264.7 细胞的增殖刺激因子。次是 AVSE-P 和 AVSE-F，在 0.13-0.50 mg/mL 的浓度下，AVSE-P 和 AVSE-F 分别能促细胞增殖 10%以上。因此，选用 0.13 mg/mL 和 0.25 mg/mL 的 AVS 和 AVSE 用于进一步实验。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鲍内脏蛋白肽抗氧化和免疫调节活性[J]. 何传波,邵杰,魏好程,熊何健,吴国宏,马英,吴建勇. 食品科学. 2018(05)
[2]鲍内脏肽粉的抗氧化活性研究[J]. 吴靖娜. 海南大学学报(自然科学版). 2015(02)
[3]超滤膜分离鲍鱼内脏酶解物及其体外抗氧化活性的研究[J]. 叶燕军,陈俊,翁武银. 现代食品科技. 2015(05)
[4]鲨鱼皮胶原与罗非鱼皮胶原的理化性质及酶解特性研究[J]. 王宝周,张萌,陈俊,翁武银. 食品工业科技. 2014(16)
[5]提取pH和温度对罗非鱼（Tilapia zillii）鱼鳞明胶特性的影响[J]. 郑惠彬,翁武银,苏文金,郝更新. 海洋与湖沼. 2013(05)
[6]鲍鱼内脏多糖的体外抗肿瘤和免疫调节活性研究[J]. 王莅莎,朱蓓薇,孙黎明,李冬梅. 大连工业大学学报. 2008(04)
[7]抗氧化活性检测方法的研究进展[J]. 刘志东,郭本恒,王荫榆. 天然产物研究与开发. 2008(03)
[8]酸水解蛋白质调味液安全生产工艺研究[J]. 李祥,李运涛,魏尚洲. 中国酿造. 2004(03)
本文编号：3585943
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