酿酒酵母EHT1、EEB1基因对葡萄酒香气的影响
发布时间：2022-01-21 06:53
为探讨酿酒酵母醇-O-酰基转移酶编码基因EHT1,EEB1在发酵代谢中对葡萄酒香气成分的影响机制。以酿酒酵母EC1118菌株为出发菌株,通过同源重组技术构建EHT1、EEB1的单基因及双基因的缺失菌株,在基因及转录水平上检测两基因的敲除程度。在检测缺失菌株的生长及发酵性能之后,使其分别发酵模拟葡萄汁及泽香葡萄汁,以研究两基因在EC1118酵母乙基酯合成中的作用,以及讨论其与高级醇、乙酸酯合成间存在的间接关系。探究缺失菌株与发酵泽香葡萄酒中香气的变化,及两基因对葡萄酒整体风味的影响。1.采用同源重组技术分别构建了两目的基因EHT1、EEB1的同源敲除片段,并分别转化敲除片段于EC1118酵母中,通过同源重组实现两目的基因的敲除。成功构建了3株缺失菌株△eht1、△eeb1、△eht1△eeb1,并检测了3株缺失菌株中目的基因的表达情况。结果表明,3株缺失菌株两基因的表达量均有一定程度下降。△eht1菌株EHT1基因表达量降低了63.57%,△eeb1菌株EEB1基因的表达量降低了43.20%,△eht1△eeb1菌株EEB1基因的表达量降低了51.7%,EHT1基因的表达量未受显著影响。...
【文章来源】：齐鲁工业大学山东省
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
高级醇合成通路图
注：根据 Park (2014) 图补充绘制天冬氨酸途径：天冬氨酸转化为高丝氨酸，高丝氨酸由 THR4 基因编码的苏氨酸合成酶催化下合成苏氨酸。苏氨酸通过 ILV1 基因编码的苏氨酸脱氢酶的作用转化为 α-酮丁酸[23]；高丝氨酸合成途径[22]：可能是高丝氨酸转化为中间物质O-乙酰高丝氨酸、胱硫醚，最后形成最终产物 α-酮丁酸，该途径未见详细报道（如图 1.2 所示）。图 1.1 高级醇合成通路图
(a) pUG6 质粒提取；(b) pSH65 质粒提取。M：mak B A+K A+K+B 获取全长为模板，以 A-F，A-R，B-F，B-R， K-F，anMX-loxP 3 组敲除片段。A 同源臂大小为 1果如图 2.2 (a)，同源臂 B 大小为 203 bp，结果均一致。通过重叠 PCR 以引物 A-F，K-R 及 A+K，A+K+B 敲除组件，敲除组件 A+K 大小为 1p。结果如图 2.2 (c)(d)。2.2 (c)表示 A+K 组件，条带。2.2 (d)表示 A+K+B 组件，在 2000 bp 处。图 2.1 pUG6 pSH65 质粒提取Figure 2.1 Plasmid extraction of pUG6 pSH65(a) (b)
【参考文献】：
期刊论文
[1]热带假丝酵母肉毒碱乙酰基转移酶基因的删除及功能鉴定[J]. 张利华,陈献忠,陈振,沈微,樊游. 食品与生物技术学报. 2018(08)
[2]葡萄酒风味物质研究进展[J]. 刘春艳,张静,李栋梅,谢岳,王振平. 食品工业科技. 2017(14)
[3]商业酵母对马瑟兰干红葡萄酒香气成分的影响[J]. 苗丽平,赵新节,董书甲,姜凯凯,原苗苗. 中国酿造. 2016(10)
[4]过表达EHT1基因对酿酒酵母己酸乙酯生产能力的影响[J]. 李锋,陈叶福,郭建,郭学武,肖冬光. 现代食品科技. 2014(03)
[5]单萜醇类在啤酒发酵过程中的变化及对酒花香气的贡献[J]. 全巧玲,江伟,王德良,孙志伟,宋涛. 食品与发酵工业. 2013(05)
[6]葡萄酒中酿酒酵母产生的重要香气化合物及其代谢调控[J]. 郝瑞颖,王肇悦,张博润,刘延琳. 中国食品学报. 2012(11)
[7]基因敲除在工业微生物育种方面的应用[J]. 宋安东,张沙沙,王风芹,谢慧,田原. 生物学杂志. 2011(06)
[8]基因敲除技术及其在微生物育种中的应用[J]. 张红岩,申乃坤,周兴. 酿酒科技. 2010(04)
博士论文
[1]刺葡萄本土酿酒酵母的筛选与利用研究[D]. 陈文婷.湖南农业大学 2017
[2]大肠杆菌系统改造及琥珀酸和5-氨基乙酰丙酸合成途径的构建[D]. 康振.山东大学 2011
硕士论文
[1]利用大肠杆菌C4途径合成5-氨基乙酰丙酸[D]. 刘文静.山东大学 2015
[2]BAT、HOM2基因敲除对黄酒酵母高级醇生成量的影响[D]. 齐亚楠.天津科技大学 2014
本文编号：3599782
【文章来源】：齐鲁工业大学山东省
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
高级醇合成通路图
注：根据 Park (2014) 图补充绘制天冬氨酸途径：天冬氨酸转化为高丝氨酸，高丝氨酸由 THR4 基因编码的苏氨酸合成酶催化下合成苏氨酸。苏氨酸通过 ILV1 基因编码的苏氨酸脱氢酶的作用转化为 α-酮丁酸[23]；高丝氨酸合成途径[22]：可能是高丝氨酸转化为中间物质O-乙酰高丝氨酸、胱硫醚，最后形成最终产物 α-酮丁酸，该途径未见详细报道（如图 1.2 所示）。图 1.1 高级醇合成通路图
(a) pUG6 质粒提取；(b) pSH65 质粒提取。M：mak B A+K A+K+B 获取全长为模板，以 A-F，A-R，B-F，B-R， K-F，anMX-loxP 3 组敲除片段。A 同源臂大小为 1果如图 2.2 (a)，同源臂 B 大小为 203 bp，结果均一致。通过重叠 PCR 以引物 A-F，K-R 及 A+K，A+K+B 敲除组件，敲除组件 A+K 大小为 1p。结果如图 2.2 (c)(d)。2.2 (c)表示 A+K 组件，条带。2.2 (d)表示 A+K+B 组件，在 2000 bp 处。图 2.1 pUG6 pSH65 质粒提取Figure 2.1 Plasmid extraction of pUG6 pSH65(a) (b)
【参考文献】：
期刊论文
[1]热带假丝酵母肉毒碱乙酰基转移酶基因的删除及功能鉴定[J]. 张利华,陈献忠,陈振,沈微,樊游. 食品与生物技术学报. 2018(08)
[2]葡萄酒风味物质研究进展[J]. 刘春艳,张静,李栋梅,谢岳,王振平. 食品工业科技. 2017(14)
[3]商业酵母对马瑟兰干红葡萄酒香气成分的影响[J]. 苗丽平,赵新节,董书甲,姜凯凯,原苗苗. 中国酿造. 2016(10)
[4]过表达EHT1基因对酿酒酵母己酸乙酯生产能力的影响[J]. 李锋,陈叶福,郭建,郭学武,肖冬光. 现代食品科技. 2014(03)
[5]单萜醇类在啤酒发酵过程中的变化及对酒花香气的贡献[J]. 全巧玲,江伟,王德良,孙志伟,宋涛. 食品与发酵工业. 2013(05)
[6]葡萄酒中酿酒酵母产生的重要香气化合物及其代谢调控[J]. 郝瑞颖,王肇悦,张博润,刘延琳. 中国食品学报. 2012(11)
[7]基因敲除在工业微生物育种方面的应用[J]. 宋安东,张沙沙,王风芹,谢慧,田原. 生物学杂志. 2011(06)
[8]基因敲除技术及其在微生物育种中的应用[J]. 张红岩,申乃坤,周兴. 酿酒科技. 2010(04)
博士论文
[1]刺葡萄本土酿酒酵母的筛选与利用研究[D]. 陈文婷.湖南农业大学 2017
[2]大肠杆菌系统改造及琥珀酸和5-氨基乙酰丙酸合成途径的构建[D]. 康振.山东大学 2011
硕士论文
[1]利用大肠杆菌C4途径合成5-氨基乙酰丙酸[D]. 刘文静.山东大学 2015
[2]BAT、HOM2基因敲除对黄酒酵母高级醇生成量的影响[D]. 齐亚楠.天津科技大学 2014
本文编号：3599782
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