基于光学适配体传感器的蔬菜中甲拌磷和水胺硫磷分析方法研究
发布时间：2022-01-25 00:52
有机磷农药被广泛用于全球范围的虫害防治,但由于有机磷农药对乙酰胆碱酯酶的抑制,可能导致生物体的神经中枢疾病甚至死亡。全球多个国家和组织均颁布了相关的法律法规,对食品、饮用水和环境中的有机磷农药残留量进行严格监管。因此,对有机磷农药进行精准定量尤为重要。由于光学传感器具有灵敏度高、操作简便等特点,开发新型的有机磷农药光学传感器有利于促进食品安全状况改善和推动食品分析技术发展。主要研究内容如下:（1）构建了基于6-羧基荧光素（FAM）和金纳米粒子（AuNPs）的荧光适配体传感器,并应用于蔬菜样品中甲拌磷农药的测定:以FAM标记的甲拌磷适配体（FAM-适配体）作为荧光供体,以柠檬酸钠还原法制备的AuNPs作为荧光受体,构建了基于荧光共振能量转移（FRET）原理的适配体传感器。没有甲拌磷存在时,AuNPs对单链核酸适配体具有吸附作用,通过FRET猝灭FAM-适配体的荧光;而当甲拌磷存在时,适配体因与甲拌磷具有更强的亲和力而离开AuNPs表面,FRET受到抑制。通过对反应时间和AuNPs浓度的优化,检测体系的荧光强度与甲拌磷浓度在0.55 mg/L的范围内呈良好的线性,线性...
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
有机磷农药抑制胆碱酯酶活性的原理
体技术体技术概述去的 30 年中，适配体和指数富集配体系统进化（SELEX）技术受到配体本质上是一段单链 DNA 或 RNA（通常为 20～80 个核苷酸，分通常具有独特的三维构象，比如茎、凸环、内环、三重体、G-四联体抗体-抗原的识别和复合物形成的作用原理类似，适配体通过范德华作用、扁平分子的堆积和形状互补等作用，利用其与目标物之间的高并与目标物结合[31]，适配体构象识别目标物形成适配体目标物复合物。适配体也被称为“化学抗体”，可作为拮抗剂、激动剂或靶向配体使图 1-1 有机磷农药抑制胆碱酯酶活性的原理[25]g. 1-1 Mechanism of the inhibition of cholinesterase by organophosphorus pesticide
从而在寡核苷酸池中进化出具有高特异性亲和的适配体[43]。如图 1-3 所示常包含以下几个步骤：1、初始寡核苷酸池的制备：首先设计和合成由 10序列组成的单链 DNA 寡核苷酸池；2、孵育：池中的随机序列折叠成不同结构，在最佳条件下与目标物进行孵育形成适配体-目标物复合物；3、分滤、亲和柱、磁珠和毛细管电泳等方法将未结合序列与目标结合序列分离利用聚合酶链式反应（DNA 适配体）或逆转录-聚合酶链式反应（RNA 标结合序列，反应产物进入下一轮筛选；5、测序：通过经典的 Sanger 测测序方法鉴定富集得到的适配体序列。通常经过 8～20 轮的筛选后可以获适配体，整个 SELEX 过程需要几周到几个月的时间。目前，通过 SELEX筛选得到多种目标物分子的高特异性和高亲和力的适配体，包括微生物蛋白质、氨基酸、抗生素、金属离子和荧光染料等。但由于目标物在体外构象通常不同于其天然构象，因此传统 SELEX 技术开发的适配体在体内是有效的[45]。为了弥补这一缺点，研究人员开发了一种新的 SELEX 技术体内应用所需的适配体，即细胞 SELEX。该技术使用整个活细胞作为目标胞 SELEX 产生的适配体具有良好的临床适用性。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Temporal trends in organophosphorus pesticides use and concentrations in river water in Japan, and risk assessment[J]. Aly Derbalah,Russel Chidya,Waqar Jadoon,Hiroshi Sakugawa. Journal of Environmental Sciences. 2019(05)
[2]环境中有机磷农药污染状况、来源及风险评价[J]. 丁浩东,万红友,秦攀,刘晓晖,刘涛,南岚,国晓春,毕斌,杨勇,卢少勇. 环境化学. 2019(03)
[3]增强氯化血红素催化活性用于水胺硫磷比色检测研究[J]. 陈华云,吴远根,杨文平,赵静. 分析化学. 2017(04)
[4]基于核酸适配体的荧光法检测水胺硫磷和丙溴磷[J]. 王丽,叶华,桑宏庆,王丹丹. 分析化学. 2016(05)
[5]孕妇毒死蜱暴露水平评估及影响因素分析[J]. 于海星,吕沈亮,郭剑秋,卢大胜,邬春华,周志俊. 环境与健康杂志. 2015(09)
[6]洪湖特色水产品对湖水及沉积物中有机氯农药的积累模式[J]. 苏秋克,祁士华,吴辰熙,胡立嵩,王伟,Ellis Burnet Julia,龚香宜,吕春玲,刘华峰. 地质科技情报. 2007(04)
[7]甲拌磷中毒的救治体会[J]. 印卫芩. 现代医药卫生. 2006(04)
[8]我国农药环境污染与危害的特点及控制对策[J]. 华小梅,江希流. 环境科学研究. 2000(03)
本文编号：3607606
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
有机磷农药抑制胆碱酯酶活性的原理
体技术体技术概述去的 30 年中，适配体和指数富集配体系统进化（SELEX）技术受到配体本质上是一段单链 DNA 或 RNA（通常为 20～80 个核苷酸，分通常具有独特的三维构象，比如茎、凸环、内环、三重体、G-四联体抗体-抗原的识别和复合物形成的作用原理类似，适配体通过范德华作用、扁平分子的堆积和形状互补等作用，利用其与目标物之间的高并与目标物结合[31]，适配体构象识别目标物形成适配体目标物复合物。适配体也被称为“化学抗体”，可作为拮抗剂、激动剂或靶向配体使图 1-1 有机磷农药抑制胆碱酯酶活性的原理[25]g. 1-1 Mechanism of the inhibition of cholinesterase by organophosphorus pesticide
从而在寡核苷酸池中进化出具有高特异性亲和的适配体[43]。如图 1-3 所示常包含以下几个步骤：1、初始寡核苷酸池的制备：首先设计和合成由 10序列组成的单链 DNA 寡核苷酸池；2、孵育：池中的随机序列折叠成不同结构，在最佳条件下与目标物进行孵育形成适配体-目标物复合物；3、分滤、亲和柱、磁珠和毛细管电泳等方法将未结合序列与目标结合序列分离利用聚合酶链式反应（DNA 适配体）或逆转录-聚合酶链式反应（RNA 标结合序列，反应产物进入下一轮筛选；5、测序：通过经典的 Sanger 测测序方法鉴定富集得到的适配体序列。通常经过 8～20 轮的筛选后可以获适配体，整个 SELEX 过程需要几周到几个月的时间。目前，通过 SELEX筛选得到多种目标物分子的高特异性和高亲和力的适配体，包括微生物蛋白质、氨基酸、抗生素、金属离子和荧光染料等。但由于目标物在体外构象通常不同于其天然构象，因此传统 SELEX 技术开发的适配体在体内是有效的[45]。为了弥补这一缺点，研究人员开发了一种新的 SELEX 技术体内应用所需的适配体，即细胞 SELEX。该技术使用整个活细胞作为目标胞 SELEX 产生的适配体具有良好的临床适用性。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Temporal trends in organophosphorus pesticides use and concentrations in river water in Japan, and risk assessment[J]. Aly Derbalah,Russel Chidya,Waqar Jadoon,Hiroshi Sakugawa. Journal of Environmental Sciences. 2019(05)
[2]环境中有机磷农药污染状况、来源及风险评价[J]. 丁浩东,万红友,秦攀,刘晓晖,刘涛,南岚,国晓春,毕斌,杨勇,卢少勇. 环境化学. 2019(03)
[3]增强氯化血红素催化活性用于水胺硫磷比色检测研究[J]. 陈华云,吴远根,杨文平,赵静. 分析化学. 2017(04)
[4]基于核酸适配体的荧光法检测水胺硫磷和丙溴磷[J]. 王丽,叶华,桑宏庆,王丹丹. 分析化学. 2016(05)
[5]孕妇毒死蜱暴露水平评估及影响因素分析[J]. 于海星,吕沈亮,郭剑秋,卢大胜,邬春华,周志俊. 环境与健康杂志. 2015(09)
[6]洪湖特色水产品对湖水及沉积物中有机氯农药的积累模式[J]. 苏秋克,祁士华,吴辰熙,胡立嵩,王伟,Ellis Burnet Julia,龚香宜,吕春玲,刘华峰. 地质科技情报. 2007(04)
[7]甲拌磷中毒的救治体会[J]. 印卫芩. 现代医药卫生. 2006(04)
[8]我国农药环境污染与危害的特点及控制对策[J]. 华小梅,江希流. 环境科学研究. 2000(03)
本文编号：3607606
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