食品中烯效唑和多效唑免疫分析新方法研究
发布时间：2022-02-15 16:08
烯效唑和多效唑是一类抑制植物生长的调节剂,广泛应用于农产生产中。现有研究表明,长期使用及滥用烯效唑和多效唑,将会对人类健康造成一定影响。因此,发展食品中烯效唑和多效唑残留检测新技术,对保障食品品质安全具有重要的现实意义。本文研究制备了抗烯效唑单克隆抗体,在此基础上,研究构建了食品中烯效唑免疫分析新方法;结合本实验室前期获得的抗多效唑单克隆抗体,研究构建了食品中多效唑免疫分析新方法。应用所建立的分析方法对食品中的烯效唑、多效唑进行检测,取得了较好的效果。其主要研究成果如下:1.运用琥珀酸酐法制备烯效唑半抗原,并通过N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法将半抗原分别与牛血清蛋白和卵清蛋白偶联,进而制备新的、有效的烯效唑免疫原和检测原。采用质谱、红外光谱、紫外吸收光谱、核磁氢谱、高效液相色谱、MALDI-TOF/MS等多种分析技术对所制备的烯效唑半抗原及人工抗原的结构进行鉴定,同时将所制备的免疫原对小鼠进行免疫,以探究其免疫原性。结果表明,烯效唑人工抗原合成成功,免疫原和检测原的偶联比分别为21.8:1和6.0:1,且所免疫的小鼠能产生相应的应答,效价可达到80000,IC50=105.63 ng/mL...
【文章来源】：南昌大学江西省211工程院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．２?ＥＤＣ法合成烯效唑免疫抗原??．．
?第２章烯效唑人工抗原的合成及鉴定???等体积混合，每孔加入１００?ｐＬ，３７?°Ｃ显色７?ｍｉｎ。??（６）终止：用排枪在每孔快速加入５０ｐＬ２ｍｏｌ／ＬＨ２ＳＯ４终止显色，然后在??４５０?ｎｍ波长处用酶标仪读取ＯＤ值，绘制标准曲线并得到半抑制浓度。??２．３结果与讨论??２．３．１烯效唑半抗原的液相色谱分析??将所制备的烯效唑半抗原进行液相色谱分析，其分析条件如下：色谱柱：??ＥｄｉｐｓｅＸＤＢ－Ｃ１８?（２５０ｍｍｘ４．６ｍｍ，５ｐｍ）；流动相：乙腈：甲醇：甲酸（Ｖ／Ｖ／Ｖ）??＝３５：２０：４５；?ｐＨ：４．３８；柱温：３０°Ｃ；流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ；进样量：ｌＯｊｉＬ；检测??波长：２４５?ｎｍ。由图２．３可知，所制备的半抗原产物内含有很少量的原料烯效唑，??半抗原所占峰面积之比为９３．４４％，表明此方法合成的半抗原纯度较高，己达到??９０％以上。??３５０?［?ｂ??３００?－?（１??２５０?－?丨??ｓ?２００?－?＼??１?１５０?－?＼??１００?－?＼??５０?－?ａ?＼??〇?．???Ａ．—??．?Ｉ?．?Ｉ?．?Ｉ?．?ｉ?．?ｉ?．?Ｉ?．?Ｉ?．?Ｉ??－５?０?５?１０?１５?２０?２５?３０?３５??ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）??图２．３烯效唑半抗原的高效液相色谱分离图??ａ．稀效卩坐；ｂ．稀效卩坐半抗原??２．３．２烯效唑半抗原的鉴定??（１）红外光谱分析??由图２．４可知，烯效唑及其半抗原红外光谱有相似之处，７７０．７?ｃｍ—１处为Ａｒ－Ｈ??１３??
?第２章烯效唑人工抗原的合成及鉴定???面外弯曲振动吸收峰，２９６８．４?ｃｍ—１处为Ｃ－Ｈ伸缩振动吸收峰，１６９０．５、１５０１．５、??１４３０．２?ｃｍ—１处为杂环双键骨架及苯环伸缩振动吸收峰。但两者的谱图之间也有不??同之处，反应后烯效唑中３４２１．０?ｃｍ＿１处Ｏ－Ｈ伸缩振动吸收峰减弱，酯基特征显??现，１１２７．３?ｃｍ“处为Ｃ－Ｏ－Ｃ单键伸缩振动吸收峰，尤其是１７２８．２４?ｃｎｆ１处的Ｃ?＝??０的伸缩振动吸收峰。表明烯效唑中的羟基与玻珀酸酐形成了酯，即半抗原产物。??闺?ＶＩ＃１，??１７２８．２４?１１２７．３??Ｑ?Ｉ?Ｉ?■?Ｉ?．?Ｉ?■?Ｉ?．?Ｉ?■?Ｉ?．?Ｉ?．?Ｉ?．??４０００?３５００?３０００?２５００?２０００?１５００?１０００?５００??Ｗａｖｅｎｕｍｂｅｒ?（ｃｍ＂?＾）??图２．４烯效唑（ａ）及其半抗原（ｂ）的红外光谱图??（２）核磁共振分析???Ｍｉｌ?，?，?１?１?ｌｉ??＊７－?＂－ｒ?－ｒ?＊ｒ??ｓ〇?Ｏｓ?ｒｆ?〇Ｃ?ｒ＾ｌ?Ｏ??Ｏｎ?ＯＣ?Ｏ?Ｏ?？?ｒｒ??ｏ?ｏ?ｒｆ?ｏ?＾?“??１５?１３?１１?９８７６５４３２１０??ｎ?（ｐｐｍ）??图２．５烯效唑的核磁共振图谱??１４??
【参考文献】：
期刊论文
[1]QuEChERS-LC-MS/MS法测定果蔬中4种植物生长调节剂残留[J]. 周纯洁,赵博,黄思瑜,吴丹,邓美林. 食品工业. 2019(09)
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[8]植物生长调节剂的研究与应用[J]. 裴海荣,李伟,张蕾,武磊,郭宗端. 山东农业科学. 2015(07)
[9]气相色谱-串联质谱法测定土壤中多效唑农药残留[J]. 王娟,胡西洲. 安徽农业科学. 2015(18)
[10]GC/ECD测定葡萄中多效唑和烯效唑的残留[J]. 徐国锋,聂继云,李静,李海飞,闫震. 农药. 2014(10)
硕士论文
[1]多种植物生长调节剂的色谱—串联质谱检测技术研究[D]. 姜楠.吉林大学 2016
[2]烯唑醇和烯效唑酶联免疫分析方法研究[D]. 江小雪.南京农业大学 2010
[3]天然水中9种三唑类农药的检测方法及其非生物降解研究[D]. 游明华.厦门大学 2008
本文编号：3626926
【文章来源】：南昌大学江西省211工程院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．２?ＥＤＣ法合成烯效唑免疫抗原??．．
?第２章烯效唑人工抗原的合成及鉴定???等体积混合，每孔加入１００?ｐＬ，３７?°Ｃ显色７?ｍｉｎ。??（６）终止：用排枪在每孔快速加入５０ｐＬ２ｍｏｌ／ＬＨ２ＳＯ４终止显色，然后在??４５０?ｎｍ波长处用酶标仪读取ＯＤ值，绘制标准曲线并得到半抑制浓度。??２．３结果与讨论??２．３．１烯效唑半抗原的液相色谱分析??将所制备的烯效唑半抗原进行液相色谱分析，其分析条件如下：色谱柱：??ＥｄｉｐｓｅＸＤＢ－Ｃ１８?（２５０ｍｍｘ４．６ｍｍ，５ｐｍ）；流动相：乙腈：甲醇：甲酸（Ｖ／Ｖ／Ｖ）??＝３５：２０：４５；?ｐＨ：４．３８；柱温：３０°Ｃ；流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ；进样量：ｌＯｊｉＬ；检测??波长：２４５?ｎｍ。由图２．３可知，所制备的半抗原产物内含有很少量的原料烯效唑，??半抗原所占峰面积之比为９３．４４％，表明此方法合成的半抗原纯度较高，己达到??９０％以上。??３５０?［?ｂ??３００?－?（１??２５０?－?丨??ｓ?２００?－?＼??１?１５０?－?＼??１００?－?＼??５０?－?ａ?＼??〇?．???Ａ．—??．?Ｉ?．?Ｉ?．?Ｉ?．?ｉ?．?ｉ?．?Ｉ?．?Ｉ?．?Ｉ??－５?０?５?１０?１５?２０?２５?３０?３５??ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）??图２．３烯效唑半抗原的高效液相色谱分离图??ａ．稀效卩坐；ｂ．稀效卩坐半抗原??２．３．２烯效唑半抗原的鉴定??（１）红外光谱分析??由图２．４可知，烯效唑及其半抗原红外光谱有相似之处，７７０．７?ｃｍ—１处为Ａｒ－Ｈ??１３??
?第２章烯效唑人工抗原的合成及鉴定???面外弯曲振动吸收峰，２９６８．４?ｃｍ—１处为Ｃ－Ｈ伸缩振动吸收峰，１６９０．５、１５０１．５、??１４３０．２?ｃｍ—１处为杂环双键骨架及苯环伸缩振动吸收峰。但两者的谱图之间也有不??同之处，反应后烯效唑中３４２１．０?ｃｍ＿１处Ｏ－Ｈ伸缩振动吸收峰减弱，酯基特征显??现，１１２７．３?ｃｍ“处为Ｃ－Ｏ－Ｃ单键伸缩振动吸收峰，尤其是１７２８．２４?ｃｎｆ１处的Ｃ?＝??０的伸缩振动吸收峰。表明烯效唑中的羟基与玻珀酸酐形成了酯，即半抗原产物。??闺?ＶＩ＃１，??１７２８．２４?１１２７．３??Ｑ?Ｉ?Ｉ?■?Ｉ?．?Ｉ?■?Ｉ?．?Ｉ?■?Ｉ?．?Ｉ?．?Ｉ?．??４０００?３５００?３０００?２５００?２０００?１５００?１０００?５００??Ｗａｖｅｎｕｍｂｅｒ?（ｃｍ＂?＾）??图２．４烯效唑（ａ）及其半抗原（ｂ）的红外光谱图??（２）核磁共振分析???Ｍｉｌ?，?，?１?１?ｌｉ??＊７－?＂－ｒ?－ｒ?＊ｒ??ｓ〇?Ｏｓ?ｒｆ?〇Ｃ?ｒ＾ｌ?Ｏ??Ｏｎ?ＯＣ?Ｏ?Ｏ?？?ｒｒ??ｏ?ｏ?ｒｆ?ｏ?＾?“??１５?１３?１１?９８７６５４３２１０??ｎ?（ｐｐｍ）??图２．５烯效唑的核磁共振图谱??１４??
【参考文献】：
期刊论文
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[6]多效唑人工抗原的合成与鉴定[J]. 王晓芬,鄢爱平,谭婷,毛雪金,刘俊俊,郭岚,万益群. 食品科学. 2016(07)
[7]高效液相色谱法同时测定果蔬中5种植物生长调节剂残留[J]. 邵金良,樊建麟,林涛,杨东顺,邹艳虹,王丽,刘宏程. 食品安全质量检测学报. 2015(08)
[8]植物生长调节剂的研究与应用[J]. 裴海荣,李伟,张蕾,武磊,郭宗端. 山东农业科学. 2015(07)
[9]气相色谱-串联质谱法测定土壤中多效唑农药残留[J]. 王娟,胡西洲. 安徽农业科学. 2015(18)
[10]GC/ECD测定葡萄中多效唑和烯效唑的残留[J]. 徐国锋,聂继云,李静,李海飞,闫震. 农药. 2014(10)
硕士论文
[1]多种植物生长调节剂的色谱—串联质谱检测技术研究[D]. 姜楠.吉林大学 2016
[2]烯唑醇和烯效唑酶联免疫分析方法研究[D]. 江小雪.南京农业大学 2010
[3]天然水中9种三唑类农药的检测方法及其非生物降解研究[D]. 游明华.厦门大学 2008
本文编号：3626926
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