超高压协同酶解对乳清蛋白理化及功能特性的影响

发布时间：2022-08-01 11:43

　　乳清是在干酪和干酪素的生产过程中产生的副产物。乳清如果不处理直接排放到环境中,会产生过高的污染,导致严重的环境问题。但是,另一方面,乳清保留了原料乳中较多的营养成分,包括蛋白质、肽、脂类、乳糖、矿物质和维生素,具有很高的营养价值。因此,作为一种生产副产物,乳清具有巨大的开发潜力。乳清蛋白是乳清的主要成分之一,具有较高的营养价值和功能特性,被广泛的应用于各种食品中,是生物活性肽的理想来源。本文以乳清蛋白为研究对象,研究了超高压预处理对乳清蛋白结构的影响;对经超高压预处理后的乳清蛋白进行酶解工艺筛选,确定了制备具有抗氧化活性和DPP-Ⅳ抑制活性双重活性的多肽的最佳用酶和酶解工艺条件,采用响应面优化酶解工艺条件;分离纯化出了酶解物中同时具有抗氧化活性和DPP-Ⅳ抑制活性的多肽。主要结论如下:（1）对乳清蛋白进行了不同压力和时间条件下的超高压处理,测定其电泳特性、表面疏水性、傅里叶变换红外光谱、巯基含量、内源荧光光谱,结果表明超高压处理后乳清蛋白电泳特性未发生显著变化,表面疏水性显著上升,α-螺旋含量上升,β-折叠含量下降,自由巯基含量明显增加,内源荧光强度发生显著变化。在所有超高压处理条件中... 

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.1 乳清及乳清蛋白概述
    1.2 乳清蛋白的改性技术
    1.3 超高压技术研究进展
    1.4 酶解技术研究进展
    1.5 抗氧化肽研究进展
    1.6 DPP-Ⅳ抑制肽研究进展
    1.7 课题研究意义与内容
        1.7.1 课题研究意义
        1.7.2 课题研究主要内容
第二章 超高压对乳清蛋白理化特性的影响
    2.1 引言
    2.2 材料和仪器
        2.2.1 材料与试剂
        2.2.2 设备与仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 超高压处理
        2.3.2 SDS-PAGE电泳检测
        2.3.3 扫描电镜观察
        2.3.4 乳清蛋白结构分析
            2.3.4.1 傅里叶变换红外光谱分析
            2.3.4.2 巯基含量的测定
            2.3.4.3 表面疏水性的测定
            2.3.4.4 内源荧光光谱分析
        2.3.5 统计分析
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 超高压对乳清蛋白电泳特性的影响
        2.4.2 超高压对乳清蛋白表面形貌的影响
        2.4.3 超高压对乳清蛋白表面疏水性的影响
        2.4.4 超高压对乳清蛋白结构的影响
            2.4.4.1 超高压对乳清蛋白二级结构的影响
            2.4.4.2 超高压对乳清蛋白三级结构的影响
    2.5 小结
第三章 超高压协同酶解工艺筛选
    3.1 引言
    3.2 材料和仪器
        3.2.1 材料与试剂
        3.2.2 设备与仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 超高压预处理乳清蛋白的制备
        3.3.2 酶解工艺流程
        3.3.3 蛋白酶水解乳清蛋白的实验设计
            3.3.3.1 单酶水解
            3.3.3.2 复合酶一步水解
            3.3.3.3 复合酶两步水解
            3.3.3.4 响应面实验工艺优化
        3.3.4 水解度的测定
        3.3.5 抗氧化活性的测定
            3.3.5.1 ABTS自由基清除能力的测定
            3.3.5.2 DPPH自由基清除能力的测定
            3.3.5.3 总还原力的测定
        3.3.6 DPP-Ⅳ抑制活性的测定
        3.3.7 统计分析
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 单因素试验
            3.4.1.1 温度对乳清蛋白水解度及抗氧化活性的影响
            3.4.1.2 时间对乳清蛋白水解度及抗氧化活性的影响
            3.4.1.3 酶用量对乳清蛋白水解度及抗氧化活性的影响
            3.4.1.4 pH对乳清蛋白水解度及抗氧化活性的影响
        3.4.2 蛋白酶及酶解工艺的筛选
        3.4.3 响应面分析
            3.4.3.1 胃蛋白酶水解乳清蛋白响应面分析
            3.4.3.2 酸性蛋白酶水解乳清蛋白响应面分析
    3.5 小结
第四章 活性肽分离纯化
    4.1 引言
    4.2 材料和仪器
        4.2.1 材料与试剂
        4.2.2 设备与仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 乳清蛋白源抗氧化肽(粗品)的制备
        4.3.2 凝胶过滤层析分离
        4.3.3 RP-HPLC分离
        4.3.4 LC-MS/MS鉴定
        4.3.5 活性肽的合成
        4.3.6 统计分析
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 乳清蛋白酶解物的凝胶过滤层析分离
        4.4.2 组分N3的RP-HPLC分离纯化
        4.4.3 乳清蛋白源生物活性肽的质谱鉴定分析
    4.5 小结
第五章 结论与展望
    5.1 主要结论
    5.2 展望
    5.3 创新点
参考文献
本研究受资助的项目
作者在攻读硕士学位期间公开发表的论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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[3]酶法降低β—乳球蛋白含量的研究[D]. 史瑜婷.安徽农业大学 2010
[4]超高压对牛乳清蛋白酶解及其产物影响的研究[D]. 陈井旺.西南大学 2009



本文编号：3667385