紫花芸豆抗氧化肽的分离纯化及其稳定性的研究
发布时间：2022-10-10 11:47
本实验以紫花芸豆蛋白为研究对象,通过单一酶水解情况筛选出水解效果较高的两种酶,以水解度为参照指标,进行双酶混合水解实验,采用单因素结合响应面实验进行数据分析,获得最优的水解条件,以期获得更优的水解效果和抗氧化活性,通过大孔树脂技术进行分离纯化,获得纯度较高的活性肽,采用反相高效液相色谱和一级质谱技术分析DPPH清除率以及一级结构,从而确定最佳的纯化工艺,最后探究外界条件（pH、温度、NaCl和模拟胃肠消化）对紫花芸豆肽抗氧化活性的影响。结果如下:1、紫花芸豆酶解产物的酶解制备实验。通过对紫花芸豆蛋白的单酶水解情况,筛选出水解效果最佳的两种酶为中性蛋白酶和碱性蛋白酶,进行双酶同步复合水解实验,采用单因素结合正交实验优化双酶同步水解工艺,获得最佳水解条件为:温度55℃、pH为10、碱性蛋白酶:中性蛋白酶=1:2、混合酶添加量5 mL、酶解时间为3 h,在此条件下测得紫花芸豆蛋白水解度为42.2%且具有较好的抗氧化活性。2、紫花芸豆酶解产物的分离制备实验。本研究通过对不同型号的大孔吸附树脂进行静态吸附能力及动态吸附试验得出以下结论:最佳大孔吸附树脂型号XAD-7HP,在此基础上对大孔树脂吸附...
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
1.1 芸豆
1.1.1 芸豆概述
1.1.2 芸豆的营养价值
1.1.3 芸豆蛋白的加工现状
1.1.4 芸豆蛋白肽
1.2 氧化应激与机体健康
1.3 食源性抗氧化肽的研究现状
1.3.1 动物源性抗氧化肽
1.3.2 植物源性抗氧化肽
1.3.3 抗氧化肽的制备、分离与纯化
1.3.4 抗氧化肽活性评价的标准
1.3.5 抗氧化肽的研究前景
1.4 抗氧化肽结构和功能研究进展
1.5 课题的研究背景及意义
1.6 本课题的研究内容
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 紫花芸豆蛋白的提取
2.2.2 紫花芸豆酶解产物的制备
2.2.3 蛋白酶的选择
2.2.4 单因素实验设计
2.2.5 响应面分析实验
2.2.6 紫花芸豆酶解产物抗氧化能力的测定
2.2.7 大孔树脂的预处理
2.2.8 大孔树脂对芸豆蛋白酶解产物的静态吸附试验
2.2.9 大孔吸附树脂动态吸附和解吸芸豆酶解产物试验
2.2.10 紫花芸豆抗氧化肽反相高效液相色谱检测
2.2.11 紫花芸豆抗氧化肽氨基酸序列测定
2.2.12 紫花芸豆抗氧化肽溶解性的测定
2.2.13 紫花芸豆抗氧化肽热稳定性的测定
2.2.14 pH对紫花芸豆抗氧化肽的抗氧化活性的影响
2.2.15 NaCl对紫花芸豆抗氧化肽的抗氧化活性的影响
2.2.16 消化对紫花芸豆抗氧化肽的抗氧化活性的影响
2.3 数据处理方法
3 结果与分析
3.1 复合酶法制取紫花芸豆抗氧化肽的研究
3.1.1 最佳蛋白酶的筛选
3.1.2 单因素试验
3.1.3 响应面试验结果与分析
3.1.4 芸豆蛋白肽抗氧化性测定
3.2 大孔吸附树脂吸附分离高活性紫花芸豆抗氧化肽及其一级结构、二级结构的研究
3.2.1 最佳树脂的筛选
3.2.2 不同pH值的芸豆蛋白水解物静态吸附曲线
3.2.3 静态解吸实验及解吸剂的选择
3.2.4 大孔树脂动态吸附与解吸实验
3.2.5 反向高效液相色谱分析
3.2.6 紫花芸豆抗氧化肽氨基酸序列测定
3.3 高活性紫花芸豆抗氧化肽稳定性的研究
3.3.1 紫花芸豆抗氧化肽溶解性测定
3.3.2 温度对紫花芸豆抗氧化肽抗氧化活性的影响
3.3.3 pH对紫花芸豆抗氧化肽抗氧化能力的影响
3.3.4 钠离子对紫花芸豆抗氧化肽的抗氧化活性影响
3.3.5 体外模拟消化对紫花芸豆抗氧化肽的抗氧化活性影响
4 讨论
5 结论
参考文献
致谢
项目资助情况
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]氧化应激在镉抑制小鼠睾丸间质细胞睾酮合成中的作用[J]. 朱文祥,刘必勇,刘洪茂,穆柯瀚,姬艳丽,徐德祥. 安徽医科大学学报. 2019(03)
[2]牦牛血抗氧化低聚肽制备工艺的优化及抗缺氧活性的初探[J]. 肖岚,何佩云,谢巧,杜昕,李诚. 食品与发酵工业. 2019(13)
[3]松仁清蛋白抗氧化肽的分离纯化及结构鉴定[J]. 卢红妍,杨行,方丽,刘诗梦,闵伟红. 食品科学. 2019(24)
[4]英国红芸豆蛋白抗氧化肽的分离纯化及体外活性研究[J]. 曲柳青,崔素萍,韩晶,穆秋霞,赵玉滨,郑喜群,左锋. 中国食品学报. 2018(12)
[5]芝麻抗氧化肽分离纯化与结构鉴定的研究[J]. 芦鑫,李若昀,张丽霞,高锦鸿,孙强,宋国辉,黄纪念. 中国粮油学报. 2019(03)
[6]亚麻多肽制备及其抗氧化活性分析[J]. 吴峰,王常青,石亚伟. 食品研究与开发. 2018(23)
[7]紫花芸豆清蛋白水解物及其膜分离产物抗氧化活性研究[J]. 林巍,许英一,马瑞,董星,刘晓兰. 食品工业. 2018(11)
[8]抗氧化胡萝卜籽肽的分离鉴定及活性表征[J]. 王惠敏,户佩,蔡甜甜,徐淑丽,洪晶,汪少芸. 食品与发酵工业. 2019(02)
[9]紫花芸豆清蛋白的提取及组分分析[J]. 林巍,许英一,刘晓兰. 食品工业. 2018(09)
[10]鸡肉-芸豆异源蛋白交联包埋姜黄素的研究[J]. 何庆燕,陈秋妹,洪永祥,汪少芸. 中国食品学报. 2018(08)
博士论文
[1]棉粕寡肽发酵制备及其生物活性和营养特性研究[D]. 刘建成.石河子大学 2018
[2]玉米多肽制备技术及其抗氧化和抗炎活性的研究[D]. 梁秋芳.江苏大学 2018
[3]欧李仁多肽的制备及其功能活性的研究[D]. 张玲.山西农业大学 2014
[4]鲢鱼鱼肉蛋白抗氧化肽的制备及其糖基化产物功能特性的研究[D]. 尤娟.中国农业大学 2014
[5]鲢鱼鱼鳞胶原蛋白肽的制备及其抗氧化活性的研究[D]. 陈日春.福建农林大学 2013
[6]泥鳅蛋白抗氧化肽的分离纯化及抗疲劳、抗癌功效研究[D]. 游丽君.华南理工大学 2010
硕士论文
[1]马鲛鱼鱼骨生物活性肽的提取与应用[D]. 张宝林.华侨大学 2018
[2]米渣酶解肽制备与生理活性及其对断奶仔猪生长性能的影响[D]. 杨亚强.南昌大学 2018
[3]绿豆蛋白酶解物的制备及其对NCTC1469细胞氧化损伤的保护作用[D]. 杜梦霞.南昌大学 2018
[4]羊血浆蛋白肽抗氧化功能评价与应用[D]. 吴立国.中国农业科学院 2018
[5]叶瓜参提取物的酶法制备及其抗衰老活性研究[D]. 杨坤.华南理工大学 2018
[6]PEG修饰黑芸豆蛋白改善其功能特性及降低凝集素致敏性的研究[D]. 何钱.合肥工业大学 2018
[7]蛋清蛋白抗氧化肽的酶法制备、微胶囊化及生物活性评价[D]. 郑颖.南昌大学 2017
[8]南极磷虾共生微生物的筛选及其抗氧化多肽的发酵制备和活性研究[D]. 梁方方.青岛科技大学 2017
[9]棉籽蛋白及其功能性多肽的制备与特性研究[D]. 宁程茜.武汉轻工大学 2016
[10]芸豆生育特性及蛋白组分功能特性研究[D]. 侯夏乐.西北农林科技大学 2015
本文编号：3689562
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
1.1 芸豆
1.1.1 芸豆概述
1.1.2 芸豆的营养价值
1.1.3 芸豆蛋白的加工现状
1.1.4 芸豆蛋白肽
1.2 氧化应激与机体健康
1.3 食源性抗氧化肽的研究现状
1.3.1 动物源性抗氧化肽
1.3.2 植物源性抗氧化肽
1.3.3 抗氧化肽的制备、分离与纯化
1.3.4 抗氧化肽活性评价的标准
1.3.5 抗氧化肽的研究前景
1.4 抗氧化肽结构和功能研究进展
1.5 课题的研究背景及意义
1.6 本课题的研究内容
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 紫花芸豆蛋白的提取
2.2.2 紫花芸豆酶解产物的制备
2.2.3 蛋白酶的选择
2.2.4 单因素实验设计
2.2.5 响应面分析实验
2.2.6 紫花芸豆酶解产物抗氧化能力的测定
2.2.7 大孔树脂的预处理
2.2.8 大孔树脂对芸豆蛋白酶解产物的静态吸附试验
2.2.9 大孔吸附树脂动态吸附和解吸芸豆酶解产物试验
2.2.10 紫花芸豆抗氧化肽反相高效液相色谱检测
2.2.11 紫花芸豆抗氧化肽氨基酸序列测定
2.2.12 紫花芸豆抗氧化肽溶解性的测定
2.2.13 紫花芸豆抗氧化肽热稳定性的测定
2.2.14 pH对紫花芸豆抗氧化肽的抗氧化活性的影响
2.2.15 NaCl对紫花芸豆抗氧化肽的抗氧化活性的影响
2.2.16 消化对紫花芸豆抗氧化肽的抗氧化活性的影响
2.3 数据处理方法
3 结果与分析
3.1 复合酶法制取紫花芸豆抗氧化肽的研究
3.1.1 最佳蛋白酶的筛选
3.1.2 单因素试验
3.1.3 响应面试验结果与分析
3.1.4 芸豆蛋白肽抗氧化性测定
3.2 大孔吸附树脂吸附分离高活性紫花芸豆抗氧化肽及其一级结构、二级结构的研究
3.2.1 最佳树脂的筛选
3.2.2 不同pH值的芸豆蛋白水解物静态吸附曲线
3.2.3 静态解吸实验及解吸剂的选择
3.2.4 大孔树脂动态吸附与解吸实验
3.2.5 反向高效液相色谱分析
3.2.6 紫花芸豆抗氧化肽氨基酸序列测定
3.3 高活性紫花芸豆抗氧化肽稳定性的研究
3.3.1 紫花芸豆抗氧化肽溶解性测定
3.3.2 温度对紫花芸豆抗氧化肽抗氧化活性的影响
3.3.3 pH对紫花芸豆抗氧化肽抗氧化能力的影响
3.3.4 钠离子对紫花芸豆抗氧化肽的抗氧化活性影响
3.3.5 体外模拟消化对紫花芸豆抗氧化肽的抗氧化活性影响
4 讨论
5 结论
参考文献
致谢
项目资助情况
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]氧化应激在镉抑制小鼠睾丸间质细胞睾酮合成中的作用[J]. 朱文祥,刘必勇,刘洪茂,穆柯瀚,姬艳丽,徐德祥. 安徽医科大学学报. 2019(03)
[2]牦牛血抗氧化低聚肽制备工艺的优化及抗缺氧活性的初探[J]. 肖岚,何佩云,谢巧,杜昕,李诚. 食品与发酵工业. 2019(13)
[3]松仁清蛋白抗氧化肽的分离纯化及结构鉴定[J]. 卢红妍,杨行,方丽,刘诗梦,闵伟红. 食品科学. 2019(24)
[4]英国红芸豆蛋白抗氧化肽的分离纯化及体外活性研究[J]. 曲柳青,崔素萍,韩晶,穆秋霞,赵玉滨,郑喜群,左锋. 中国食品学报. 2018(12)
[5]芝麻抗氧化肽分离纯化与结构鉴定的研究[J]. 芦鑫,李若昀,张丽霞,高锦鸿,孙强,宋国辉,黄纪念. 中国粮油学报. 2019(03)
[6]亚麻多肽制备及其抗氧化活性分析[J]. 吴峰,王常青,石亚伟. 食品研究与开发. 2018(23)
[7]紫花芸豆清蛋白水解物及其膜分离产物抗氧化活性研究[J]. 林巍,许英一,马瑞,董星,刘晓兰. 食品工业. 2018(11)
[8]抗氧化胡萝卜籽肽的分离鉴定及活性表征[J]. 王惠敏,户佩,蔡甜甜,徐淑丽,洪晶,汪少芸. 食品与发酵工业. 2019(02)
[9]紫花芸豆清蛋白的提取及组分分析[J]. 林巍,许英一,刘晓兰. 食品工业. 2018(09)
[10]鸡肉-芸豆异源蛋白交联包埋姜黄素的研究[J]. 何庆燕,陈秋妹,洪永祥,汪少芸. 中国食品学报. 2018(08)
博士论文
[1]棉粕寡肽发酵制备及其生物活性和营养特性研究[D]. 刘建成.石河子大学 2018
[2]玉米多肽制备技术及其抗氧化和抗炎活性的研究[D]. 梁秋芳.江苏大学 2018
[3]欧李仁多肽的制备及其功能活性的研究[D]. 张玲.山西农业大学 2014
[4]鲢鱼鱼肉蛋白抗氧化肽的制备及其糖基化产物功能特性的研究[D]. 尤娟.中国农业大学 2014
[5]鲢鱼鱼鳞胶原蛋白肽的制备及其抗氧化活性的研究[D]. 陈日春.福建农林大学 2013
[6]泥鳅蛋白抗氧化肽的分离纯化及抗疲劳、抗癌功效研究[D]. 游丽君.华南理工大学 2010
硕士论文
[1]马鲛鱼鱼骨生物活性肽的提取与应用[D]. 张宝林.华侨大学 2018
[2]米渣酶解肽制备与生理活性及其对断奶仔猪生长性能的影响[D]. 杨亚强.南昌大学 2018
[3]绿豆蛋白酶解物的制备及其对NCTC1469细胞氧化损伤的保护作用[D]. 杜梦霞.南昌大学 2018
[4]羊血浆蛋白肽抗氧化功能评价与应用[D]. 吴立国.中国农业科学院 2018
[5]叶瓜参提取物的酶法制备及其抗衰老活性研究[D]. 杨坤.华南理工大学 2018
[6]PEG修饰黑芸豆蛋白改善其功能特性及降低凝集素致敏性的研究[D]. 何钱.合肥工业大学 2018
[7]蛋清蛋白抗氧化肽的酶法制备、微胶囊化及生物活性评价[D]. 郑颖.南昌大学 2017
[8]南极磷虾共生微生物的筛选及其抗氧化多肽的发酵制备和活性研究[D]. 梁方方.青岛科技大学 2017
[9]棉籽蛋白及其功能性多肽的制备与特性研究[D]. 宁程茜.武汉轻工大学 2016
[10]芸豆生育特性及蛋白组分功能特性研究[D]. 侯夏乐.西北农林科技大学 2015
本文编号：3689562
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