基于群体感应系统分析杀鲑气单胞菌与荧光假单胞菌的共培养研究

发布时间：2022-12-11 15:34

　　水产品腐败是一个相对复杂的过程,而微生物的生长代谢被认为是导致水产品发生腐败变质的重要因素。研究表明,大多数水产品致腐菌通过分泌N-酰基高丝氨酸内酯类（N-acyl-homoserine lactones,AHLs）信号分子参与致腐因子的表达,该过程受群体感应系统的调控。因此,基于群体感应系统探究水产品腐败菌的致腐机制及靶向调控为水产品保鲜提供了新策略。目前相关方面的基础研究也在逐渐增多,但相对来说更注重于菌株分离、致腐因子调控及抑制剂开发等方面,对于菌群间相互作用及种间群体感应的研究较少。因此,本文以水产品致腐菌杀鲑气单胞菌和荧光假单胞菌为主要研究对象,基于群体感应系统分析共培养条件下两菌株间的相互作用,同时对单菌及共培养时菌株的挥发性有机化合物进行了测定。主要结论如下:1.首先从冷藏腐败海鲈鱼中分离得到杀鲑气单胞菌CS12,采用生物报告菌法及GC-MS检测可知CS12具有群体感应现象,主要分泌C₆-HSL;对杀鲑气单胞菌CS12与水产品其它致腐菌间的相互作用进行了分析,结果表明共存体系中菌密度和产AHLs能力均受到抑制,AHLs的分泌存在密度依赖,荧光假单胞菌... 

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 细菌群体感应
    1.2 细菌群体感应与水产品腐败
        1.2.1 微生物与水产品腐败变质
        1.2.2 水产品腐败菌群体感应研究进展
            1.2.2.1 杀鲑气单胞菌与群体感应
            1.2.2.2 荧光假单胞菌与群体感应
    1.3 细菌种间相互作用
        1.3.1 微生物共培养
        1.3.2 种间群体感应
    1.4 细菌挥发性有机化合物
    1.5 研究目的意义及主要内容
        1.5.1 研究目的意义
        1.5.2 研究内容
第二章 海鲈鱼源杀鲑气单胞菌CS12的群体感应现象及与水产优势腐败菌的共培养研究
    2.1 前言
    2.2 主要材料与仪器
        2.2.1 材料、菌株及培养条件
        2.2.2 主要试剂
        2.2.3 主要仪器
    2.3 方法
        2.3.1 细菌分离、鉴定
        2.3.2 生物报告菌法检测AHLs活性
        2.3.3 GC-MS定性检测AHLs种类
        2.3.4 单菌和共培养菌株生长情况及产信号分子能力检测
        2.3.5 数据分析
    2.4 结果与分析
        2.4.1 16SrRNA检测与系统发育树构建
        2.4.2 菌株CS12的AHLs活性检测
            2.4.2.1 生物报告菌法检测
            2.4.2.2 GC-MS检测
        2.4.3 单菌及共培养生长情况及产AHLs能力测定
    2.5 小结
第三章 共存体系中杀鲑气单胞菌CS12 与荧光假单胞菌PF03 的相互作用研究
    3.1 前言
    3.2 主要材料与仪器
        3.2.1 菌株及培养条件
        3.2.2 主要试剂
        3.2.3 主要仪器
    3.3 方法
        3.3.1 菌株活化培养
        3.3.2 生长动力学曲线及pH测定
        3.3.3 单菌及共培养BS和 CFS中 AHLs分泌情况
        3.3.4 不同接种比例共培养菌株的生长、群集、泳动及AHLs活性检测
        3.3.5 单菌及共培养菌株的电子鼻测定
        3.3.6 数据分析
    3.4 结果与分析
        3.4.1 生长动力学曲线测定及生化鉴定
        3.4.2 菌株PF03 及共培养菌株BS、CFS中 AHLs活性验证
        3.4.3 单菌及共培养菌株的生长情况及运动活性分析
        3.4.4 单菌及共培养菌株AHLs分泌情况
        3.4.5 单菌及共培养菌株挥发性气味分析
    3.5 小结
第四章 荧光假单胞菌CFS及乙酸乙酯粗提液对杀鲑气单胞菌CS12 的抑制作用研究
    4.1 前言
    4.2 主要材料与仪器
        4.2.1 菌株及培养条件
        4.2.2 主要试剂
        4.2.3 主要仪器
    4.3 方法
        4.3.1 PF03-CFS及粗提液中AHLs活性检测
        4.3.2 PF03-CFS及粗提液对CS12 生长情况的影响
        4.3.3 PF03 乙酸乙酯粗提液的抑菌活性检测
        4.3.4 PF03 及共培养乙酸乙酯粗提液对CS12 的抑菌作用
        4.3.5 数据分析
    4.4 结果与分析
        4.4.1 PF03的CFS及粗提液中AHLs活性检测
        4.4.2 PF03的CFS及乙酸乙酯粗提液对CS12 生长情况的影响
        4.4.3 PF03 乙酸乙酯粗提液的抑菌性分析
        4.4.4 PF03 及共培养乙酸乙酯粗提液对CS12 的抑菌性分析
    4.5 小结
第五章 顶空-固相微萃取技术分析荧光假单胞菌与杀鲑气单胞菌共培养挥发性成分研究
    5.1 前言
    5.2 主要材料与仪器
        5.2.1 菌株及培养条件
        5.2.2 主要试剂与仪器
    5.3 方法
        5.3.1 电子鼻测定
        5.3.2 HS-SPME-GC-MS分析细菌VOCs
            5.3.2.1 待测样品的制备
            5.3.2.2 顶空挥发性成分的萃取
            5.3.2.3 GC-MS联用条件
        5.3.3 数据分析
    5.4 结果与讨论
        5.4.1 电子鼻检测结果分析
        5.4.2 单菌及共培养菌株挥发性成分分析
        5.4.3 PF03 乙酸乙酯粗提液对菌株CS12 挥发性成分的影响
    5.5 本章小结
第六章 结论、创新点和展望
    6.1 结论
    6.2 创新点
    6.3 展望
参考文献
硕士期间发表论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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[10]大黄鱼源气单胞菌的分离鉴定及致腐表型[J]. 葛阳杨,朱军莉,刘丽,任奕婧.  水产学报. 2017(06)

博士论文
[1]对虾生物保鲜与其熟制品保藏技术的研究[D]. 曹荣.中国海洋大学 2009



本文编号：3719039