基于蛋白质组学与免疫学方法的丝绸文物分析鉴定研究

发布时间：2023-01-03 09:51

　　近些年来,丝绸的起源和传播得到了越来越多的研究学者关注,然而这一直是考古学界的一个未解之谜。蚕丝在种类上可以分为桑蚕丝、柞蚕丝、蓖麻蚕丝和栗蚕丝等,不同种类的蚕丝具有不同的结构和性能,以不同蚕丝为原料经过一系列工艺流程得到的丝绸样品也具有不同的形貌和结构,分析不同蚕丝种属以及不同文物样种属鉴定对研究丝绸的起源和传播具有重要意义。本论文通过采用蛋白质组学的方法分析现代蚕丝样品,获得不同种属蚕丝的标志性蛋白,建立基于蛋白质组学分析蚕丝种属鉴定的方法;通过分析不同蚕丝的氨基酸序列,选取特征肽段作为半抗原,偶联载体蛋白以获得具有免疫原性的完全抗原,通过动物免疫的方法制备抗体,建立基于免疫学原理的蚕丝种属鉴定方法;在此基础上继续分析老化样品,从免疫学的角度研究样品老化机理,为古代丝绸鉴定的研究提供理论基础。首先,采用铜乙二胺溶液提取不同蚕丝中的丝素蛋白,使用溶液内酶切的方法将蛋白酶解,利用超高效液相色谱串联质谱分析酶解之后的蛋白质,获得不同种属蚕丝的标志性蛋白。桑蚕丝标志性蛋白:编码为P05790和P21828的蛋白;柞蚕丝标志性蛋白:编码为O76786的蛋白;蓖麻蚕丝的标志性蛋白:编码为A0A... 

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 引言
    1.2 丝绸文物概况
    1.3 丝绸类文物鉴定方法
    1.4 蛋白质组学技术介绍
        1.4.1 蛋白质组学技术简介
        1.4.2 蛋白质组学技术的应用
    1.5 免疫学检测技术介绍
        1.5.1 免疫学技术简介
        1.5.2 免疫学技术的应用
    1.6 课题的提出和意义
    1.7 研究技术路线、难点与创新点
        1.7.1 研究技术路线
        1.7.2 技术难点
        1.7.3 技术创新点
第二章 基于蛋白质组学方法的丝绸文物分析鉴定研究
    2.1 实验试剂及仪器
        2.1.1 实验试剂
        2.1.2 实验仪器
    2.2 实验材料
        2.2.1 文物样品
        2.2.2 溶液的配制
        2.2.3 实验材料的制备
    2.3 实验步骤
        2.3.1 样品的处理
        2.3.2 LC-MS/MS 质谱分析
        2.3.3 数据库检索分析
    2.4 实验材料表征及测试
        2.4.1 表观形貌的表征
        2.4.2 化学结构的表征
    2.5 结果与讨论
        2.5.1 表观形貌结果分析
        2.5.2 化学结构结果分析
        2.5.3 LC-MS/MS 结果分析
        2.5.4 蚕丝标志性蛋白的选择
        2.5.5 丝绸文物样的种属鉴定
    2.6 本章小结
第三章 基于免疫学方法的丝绸文物分析鉴定研究
    3.1 实验试剂与仪器
        3.1.1 实验试剂
        3.1.2 实验仪器
    3.2 实验材料
        3.2.1 样品的介绍
        3.2.2 溶液的配制
        3.2.3 实验材料的制备
    3.3 实验步骤
        3.3.1 抗原的制备
        3.3.2 抗体的制备
        3.3.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹测试
        3.3.4 酶联免疫测试
    3.4 实验材料表征及测试
        3.4.1 聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳
        3.4.2 抗体特异性检测
    3.5 结果讨论与分析
        3.5.1 SDS-PAGE 电泳结果
        3.5.2 抗体的特异性检测
        3.5.3 酶联免疫检测结果
            3.5.3.1 间接酶联免疫对抗体最佳稀释倍数的选择
            3.5.3.2 间接酶联免疫对丝素蛋白的交叉鉴定
            3.5.3.3 间接酶联免疫对文物样品的种属鉴定
    3.6 本章小结
第四章 基于免疫学方法的蚕丝老化分析鉴定研究
    4.1 实验试剂及仪器
        4.1.1 实验试剂
        4.1.2 实验仪器
    4.2 实验材料
        4.2.2 溶液的配制
        4.2.3 实验材料的制备
    4.3 实验步骤
        4.3.1 样品的制备
        4.3.2 抗原的制备
        4.3.3 抗体的制备
        4.3.4 间接酶联免疫测试步骤
        4.3.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹检测步骤
    4.4 实验材料表征及测试
        4.4.1 化学结构表征
        4.4.2 氨基酸分析
        4.4.3 分子量表征
    4.5 结果讨论与分析
        4.5.1 化学结构分析
        4.5.2 氨基酸分析
        4.5.3 分子量变化分析
        4.5.4 间接酶联免疫检测结果分析
            4.5.4.1 抗原抗体最佳结合条件的选择
            4.5.4.2 间接ELISA检测结果
        4.5.5 免疫印迹检测结果分析
    4.6 本章小结
第五章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
附：攻读硕士期间取得与学位论文直接相关的成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]家蚕的起源与进化研究进展[J]. 刘彦群,鲁成.  蚕业科学. 2018(03)
[2]全自动免疫印迹检测系统在HIV抗体确证试验中的应用研究[J]. 董雪,刘建敏,李福安,刘宏生,李欣,刘娜.  中国卫生检验杂志. 2018(05)
[3]广西VCT门诊HIV-1抗体阳性人群WB条带分析[J]. 庞贤武,梁冰玉,王建,唐凯玲,梁淑家.  中国艾滋病性病. 2018(02)
[4]大鼠肝组织中P-糖蛋白的免疫印迹检测方法[J]. 吴琼,杨友辉,杨健,薛维娜,李勇军,何彬,兰燕宇,刘亭.  贵州医药. 2018(01)
[5]果梅CCoAOMT蛋白Western-blot体系建立与优化[J]. 张勇,侍婷,吴欣欣,高志红.  南京农业大学学报. 2017(06)
[6]细胞样Western Blot分析技术探讨[J]. 汤加勇,赵华.  实验科学与技术. 2017(06)
[7]应用光学显微镜对几种不同毛纤维形态结构的比较研究[J]. 段涛,胡雅洁,麦热依·吉力哈依达尔,张微.  中国畜牧杂志. 2017(05)
[8]丝绸历史与文化（1）:丝绸之路的起源[J]. 丝绸文化与产品编写组.  现代丝绸科学与技术. 2017(01)
[9]丝绸之路的起源[J]. 潘思敏.  初中生辅导. 2017(Z1)
[10]红外光谱在纤维质文物材料鉴别中的应用研究[J]. 石爽.  化工管理. 2015(17)

博士论文
[1]三类重要渔药残留免疫快速检测技术[D]. 彭娟.江南大学 2017
[2]贾湖遗址墓葬土壤中蚕丝蛋白残留物的鉴定与分析[D]. 李力.中国科学技术大学 2015
[3]基于抗原/抗体反应的生物检测技术及其应用研究[D]. 张春秀.东南大学 2003

硕士论文
[1]拉沙里菌素单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立[D]. 杨小康.扬州大学 2017
[2]基于量子点标记免疫分析技术建立火锅底料中吗啡检测方法的研究[D]. 韩玉凤.江苏大学 2017
[3]不同老化环境对丝织品性能的影响研究[D]. 马玲.北京服装学院 2010
[4]糟朽丝绸的老化评估和加固保护研究[D]. 杨晓慧.陕西师范大学 2002



本文编号：3727238