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芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响及其作用机制研究

发布时间:2023-03-11 18:07
  食物过敏作为全球公共健康问题,预防、控制其发生是食品质量与安全把控的首要问题。RBL-2H3细胞具有与肥大细胞相似的生物学特征,细胞表面可表达高亲和力受体FcεRI,是研究食物过敏的一种常见细胞模型。芸香柚皮苷是一种具有抗过敏活性的黄酮类化合物。本文首先采用传统的RBL-2H3细胞脱颗粒模型,探讨芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响及具体作用机制;其次,通过构建OVA激活的RBL-2H3细胞高反应性脱颗粒免疫模型,探讨芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞高反应性脱颗粒的影响及其作用机制,旨在进一步明确芸香柚皮苷的抗过敏活性。芸香柚皮苷对IgE介导的细胞脱颗粒的影响:基于对RBL-2H3细胞活力无影响的芸香柚皮苷浓度,通过ELISA考察芸香柚皮苷对β-Hex、组胺、IL-4和TNF-α释放的影响,并结合AFM对细胞形态考察,证实了芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞脱颗粒有显著抑制作用;通过荧光显微镜考察RBL-2H3细胞内荧光强度,证实了芸香柚皮苷对胞内钙离子增加有显著性抑制作用;通过RT-PCR法考察表面受体FcεRI亚基mRNA的表达,证实了芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞表面受体FcεR...

【文章页数】:83 页

【学位级别】:硕士

【文章目录】:
中文摘要
abstract
缩略词
第1章 绪论
    1.1 食物过敏
        1.1.1 食物过敏现状
        1.1.2 常见食物过敏原
        1.1.3 食物过敏反应机制
    1.2 肥大细胞
        1.2.1 肥大细胞脱颗粒机制
        1.2.2 常见MC脱颗粒模型
    1.3 天然抗过敏黄酮类小分子化合物
        1.3.1 黄酮类抗过敏化合物
        1.3.2 芸香柚皮苷
    1.4 本文研究的目的和内容
        1.4.1 本文研究的目的与意义
        1.4.2 本文研究的内容
第2章 芸香柚皮苷对Ig E介导的RBL-2H3 细胞脱颗粒的影响及其作用机制
    2.1 引言
    2.2 实验材料、仪器与试剂
        2.2.1 主要实验仪器
        2.2.2 主要实验试剂
        2.2.3 主要溶液的配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 RBL-2H3细胞的培养
        2.3.2 细胞活力的测定
        2.3.3 细胞活化脱颗粒β-Hex的检测
        2.3.4 细胞上清液细胞因子的测定
        2.3.5 原子力显微镜观察细胞形态学上的变化
        2.3.6 细胞内钙离子的测定
        2.3.7 mRNA的表达量的测定
        2.3.8 Western blot分析
    2.4 统计学方法
    2.5 实验结果
        2.5.1 芸香柚皮苷对RBL-2H3 细胞活力的影响
        2.5.2 芸香柚皮苷对细胞脱颗粒释放β-Hex、组胺、IL-4 和TNF-α的影响
        2.5.3 芸香柚皮苷对RBL-2H3 细胞脱颗粒引起的形貌变化的影响
        2.5.4 芸香柚皮苷对RBL-2H3 细胞内钙离子的影响
        2.5.5 芸香柚皮苷对RBL-2H3 细胞表面受体(FcεRI)m RNA表达的影响
        2.5.6 芸香柚皮苷对IgE介导的RBL-2H3 细胞信号通路的影响
    2.6 讨论
    2.7 小结
第3章 构建OVA激活的RBL-2H3 细胞高反应性脱颗粒模型
    3.1 引言
    3.2 实验材料、仪器与试剂
    3.3 实验方法
        3.3.1 小鼠血清中OVA特异性IgE(sIgE)的测定
        3.3.2 流式细胞术测定RBL-2H3 细胞与IgE的结合能力
        3.3.3 RBL-2H3 细胞脱颗粒实验
        3.3.4 CCK8 法检测RBL-2H3 细胞的细胞活力
    3.4 统计学方法
    3.5 实验结果
        3.5.1 小鼠血清中sIgE的含量
        3.5.2 流式细胞术分析RBL-2H3 细胞与IgE的结合能力
        3.5.3 RBL-2H3 细胞脱颗粒能力的分析
        3.5.4 OVA与过敏血清对RBL-2H3 细胞活力的影响
    3.6 讨论
    3.7 小结
第4章 芸香柚皮苷对OVA激活的RBL-2H3 细胞高反应性脱颗粒的作用机制
    4.1 引言
    4.2 实验材料、仪器与试剂
    4.3 实验方法
        4.3.1 OVA激活的RBL-2H3 细胞高反应性脱颗粒
        4.3.2 细胞脱颗粒释放的细胞因子测定
        4.3.3 Western blot分析RBL-2H3 细胞信号通路中相关蛋白
    4.4 统计学方法
    4.5 实验结果
        4.5.1 OVA激活的RBL-2H3 细胞脱颗粒
        4.5.2 芸香柚皮苷对RBL-2H3 细胞高反应性脱颗粒细胞上清液中细胞因子含量的影响
        4.5.3 芸香柚皮苷对RBL-2H3 细胞高反应性脱颗粒免疫模型中MAPK、NF-κB和 Lyn激酶信号通路的影响
    4.6 讨论
    4.7 小结
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
    5.3 创新性
参考文献
导师简介
作者简介
硕士期间研究成果
致谢



本文编号:3759993

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