无偶斗星介（Cypridopsis vidua）三种渗透压调节相关基因在高盐环境中的表达模式
发布时间：2020-03-30 22:01
【摘要】：无偶斗星介(Cypridopsisvidua)是介形类中为数不多的全球分布物种之一,它对各种环境因子均具有较强的耐受性。众所周知,盐度是水生生物分布的主要限制性因素。无偶斗星介作为淡水种,其可分布于盐度为8‰左右的自然水体中,因此该物种成为研究水生动物渗透压调节的良好材料。本论文通过研究无偶斗星介三种渗透压调节相关基因表达量对高盐环境的响应,探讨了小型甲壳动物渗透压调节基因应对突发盐度升高时的分子响应机制。研究结果为深入了解广布种水生动物的适应性分布提供了理论依据。本研究首次克隆获得了参与无偶斗星介渗透压调节的V-type H+-ATPase B亚基基因(命名为CvVHA-B)和Na+/K+/2Cl-共转运蛋白基因(命名为CvNKCC),其中CvVHA-B基因的cDNA全长为2178bp,编码氨基酸498个;CvNKCC基因的cDNA全长为4001bp,编码氨基酸1055个。两条基因的分子系统学研究结果显示无偶斗星介和其他“泛甲壳动物”聚为一支,说明CvVHA-B和CvNKCC基因在“泛甲壳动物”的进化中均具有保守性。在上述工作基础上,本研究进一步应用改良后的整体原位杂交技术,对CvVHA-B和CvNKCC基因mRNA的表达位置进行了研究,初步确定无偶斗星介的内壳层是渗透压调节的主要功能部位。本研究的盐度梯度实验(0、4、8、12、16和20‰)确定了无偶斗星介于室内急性盐度胁迫条件下24h内可忍耐的高盐度为8‰。基于此,本研究采用实时荧光定量PCR方法探讨了在4‰和8‰盐度浓度条件下,Na+/K+-ATPaseα亚基基因(命名为CvNKA-α)、CvVHA-B和CvNKCC三种基因部分片段的mRNA表达量随时间的变化,结果发现:4‰盐度条件下三种基因的表达量与对照组(0‰)间无明显差别(P0.05);8‰盐度条件下,三种基因表达量的变化表现出一定的时序性,即:CvNKA:α的表达量于3h时显著下降(P0.05),随即CvVHA-B于12h时显著性下降(P0.05),而CvNKCC则于24h时呈现显著性上升(P0.05)。结合三种基因在动物盐度渗透压调节中的作用,本研究认为:在面对突发的高盐环境时,该物种可采用下调CvNKA-α和CvVHA-B的表达量及上调CvNKCC的表达量的一种分子策略来加以适应。这很好地解释了淡水种无偶斗星介能够分布于高达8‰的自然水体的原因。
【图文】：
３．１总ＲＮＡ的提取逡逑利用Ｔｒｉｚｏｌ法提取得到的无偶斗星介整体的总ＲＮＡ，经过ＤＮａｓｅ酶处理后的逡逑琼脂糖凝胶电泳结果（图２－１）显示出清晰的２８Ｓ和１８Ｓ两条条带，并且１８Ｓ条带逡逑的亮度明显亮于２８Ｓ条带，但是没有显示出５Ｓ条带。经核酸蛋白检测仪检测后，逡逑显示Ａ２６０／Ａ２８０值均处于１．８－２．０，这表明提取获得的总ＲＮＡ样品的完整性良好，逡逑所以本研究中仍采用该提取结果用作于后续的基因全长序列的克隆。逡逑图２－１无偶斗n沤檎逄崛〉淖埽遥危恋缬窘峁＃郑海遥危僚芙撼晒椎溃唬停海模蹋玻埃埃埃模危铃义希停幔颍耄澹蝈义希疲椋纾玻卞澹裕铮簦幔戾澹遥危铃澹澹欤澹悖簦颍铮穑瑁铮颍澹螅椋箦澹颍澹螅酰欤簦箦澹铮驽澹簦瑁邋澹鳎瑁铮欤邋澹铮驽澹茫澹觯椋洌酰幔澹郑哄澹樱酰悖悖澹螅螅妫酰戾澹穑铮颍邋澹铮驽澹遥危铃义希颍酰猓猓椋睿珏澹纾欤酰澹诲澹停哄澹模蹋玻埃埃板澹模危铃澹停幔颍耄澹蝈义希常插位颍悖模危寥ば蛄屑捌浞治鲥义希常玻被虻娜ば蛄屑吧镄畔⒀у义弦晕夼级沸墙椋茫模危廖０澹瑧朴眉虿⒁铮校茫一竦昧艘惶酰矗福福猓鸬模铮颍恚义希祷虻暮诵钠涡蛄屑暗缬窘峁ㄍ迹玻玻捎锰匾煨砸锿ü郑遥粒茫藕停场义希遥粒茫爬┰黾捌唇樱钪盏玫交颍悖模危寥ば蛄形玻保罚ュ澹ㄍ迹玻常义舷忠烟峤唬牵澹睿拢幔睿耄嗪盼停龋梗玻保矗叮啊＃茫觯品玻矗祷蛉ず塑账嵝蛄屑八嗦氲腻义希玻卞义
本文编号：2608121
【图文】：
３．１总ＲＮＡ的提取逡逑利用Ｔｒｉｚｏｌ法提取得到的无偶斗星介整体的总ＲＮＡ，经过ＤＮａｓｅ酶处理后的逡逑琼脂糖凝胶电泳结果（图２－１）显示出清晰的２８Ｓ和１８Ｓ两条条带，并且１８Ｓ条带逡逑的亮度明显亮于２８Ｓ条带，但是没有显示出５Ｓ条带。经核酸蛋白检测仪检测后，逡逑显示Ａ２６０／Ａ２８０值均处于１．８－２．０，这表明提取获得的总ＲＮＡ样品的完整性良好，逡逑所以本研究中仍采用该提取结果用作于后续的基因全长序列的克隆。逡逑图２－１无偶斗n沤檎逄崛〉淖埽遥危恋缬窘峁＃郑海遥危僚芙撼晒椎溃唬停海模蹋玻埃埃埃模危铃义希停幔颍耄澹蝈义希疲椋纾玻卞澹裕铮簦幔戾澹遥危铃澹澹欤澹悖簦颍铮穑瑁铮颍澹螅椋箦澹颍澹螅酰欤簦箦澹铮驽澹簦瑁邋澹鳎瑁铮欤邋澹铮驽澹茫澹觯椋洌酰幔澹郑哄澹樱酰悖悖澹螅螅妫酰戾澹穑铮颍邋澹铮驽澹遥危铃义希颍酰猓猓椋睿珏澹纾欤酰澹诲澹停哄澹模蹋玻埃埃板澹模危铃澹停幔颍耄澹蝈义希常插位颍悖模危寥ば蛄屑捌浞治鲥义希常玻被虻娜ば蛄屑吧镄畔⒀у义弦晕夼级沸墙椋茫模危廖０澹瑧朴眉虿⒁铮校茫一竦昧艘惶酰矗福福猓鸬模铮颍恚义希祷虻暮诵钠涡蛄屑暗缬窘峁ㄍ迹玻玻捎锰匾煨砸锿ü郑遥粒茫藕停场义希遥粒茫爬┰黾捌唇樱钪盏玫交颍悖模危寥ば蛄形玻保罚ュ澹ㄍ迹玻常义舷忠烟峤唬牵澹睿拢幔睿耄嗪盼停龋梗玻保矗叮啊＃茫觯品玻矗祷蛉ず塑账嵝蛄屑八嗦氲腻义希玻卞义
本文编号：2608121
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/2608121.html
教材专著
