牙表皮来源的Wnt配体对牙齿分化的影响

发布时间：2020-04-27 07:39

【摘要】：不同的Wnt配体在牙齿发育过程中的上皮以及间充质具有不同的时空表达,然而,这些差异表达的Wnt配体在牙齿发育中的作用在之前的研究中并不明确。Wntless(Wls)功能的缺失会导致Wnt配体无法运输到细胞外,因而Wls的条件性敲除小鼠近年来已经成为研究Wnt配体功能的重要工具。在牙齿发育过程中,Shh特异性的在牙源性上皮特异性表达,为了研究在牙齿上皮特异性表达的Wnt配体的功能,在本研究中,我们使用Shh-Cre来敲除牙齿上皮表达的Wls来进行研究。我们发现,使用Shh-Cre对Wls进行条件性敲除WlsShh-Cre会导致牙齿分化缺陷,具体表现在成釉细胞和成牙本质细胞的极性缺失,并缺乏分化标志物(Dspp,Osterxi,Decorin,Colla1)的表达,同时伴随着牙本质含量的显著降低。我们进一步使用Wnt信号通路的报告基因小鼠BAT-GAL小鼠来研究Wls敲除对经典Wnt信号通路的影响,发现在E16.5 WlsShh-Cre小鼠牙齿中,Wnt信号通路活性在第二釉结明显下调,此外Wnt信号通路的靶基因Lef1,Axin2和Dkk1的表达显著下调。以上结果就提示,WlsShh-Cre突变牙齿中的经典的wnt信号通路活性下调。此外,我们发现Shh信号通路分子Shh,Ptc 和Gli1在E16.5的牙齿中的表达也显著下调。我们还发现,在E16.5天,Wls突变牙齿的上皮和间充质中细胞增殖发生异常;然而细胞凋亡并没有受到影响。通过染色质免疫沉淀实验我们发现成牙本质细胞分化的关键标志物Decorin和Colla1在牙齿发育过程中是Wnt信号通路的靶基因,它们在WlsShh-Cre牙齿中下调。此外,体外组织培养实验也发现,经使用LiCl诱导Wnt信号通路活性可以导致Decorin和Colla1的表达在Wls突变牙齿中显著增加。综上所述,我们的研究结果表明,牙表皮来源的Wnt配体对牙齿分化有重要的调控作用。
【图文】：

悘＿＿１：：：\l逡逑灥口孭＿逡逑图１邋Ｗｌｓ介导的Ｗｎｔ在小鼠牙齿发育ＳＨＨ细胞系中影响。（图１，Ａ－Ｃ，逡逑Ａ’－Ｃ’）：通过用组织学分析结果显示，Ｗ／／＂Ａ—Ｄ＇＊Ｅ１４．５可以正常发展到帽逡逑状期ＣＡＰ阶段，但是突变体要比对照组牙齿显示的小。在Ｅ１７．５天（图１，逡逑Ｂ，Ｂ’；邋Ｃ，Ｃ’）和ｐＯ处的磨牙（图１，Ｄ．Ｄ’）Ｍａｓｓｏｎ三色染色显、示圫逡逑与对照组相比较尺寸变小，小鼠牙本质基质（箭头方向）减少。Ｅ，逡逑Ｅ’；邋Ｆ，，邋Ｆ’：显示了邋Ｃ，邋Ｃ’，Ｄ，Ｄ’方框内区域的高倍放大率照片。比例尺：逡逑Ｂ－Ｄ，邋ＢＬＤ，，２００ｐｍ；Ｅ，Ｆ，邋Ｅ，，Ｆ，，邋５０叫１；其他的是邋１００叫１。逡逑２６逡逑

逡逑图２．１原位杂交结果显示在圫－？中（图２．１，Ａ－Ｆ，Ａ’－Ｆ’）逡逑Ａｍｅｌｏｇｅｎｉｎ、Ｄｓｐｐ、Ｃｏｉｌｅｄ、Ｏｓｔｅｒｉｘ、Ｄｅｃｏｒｉｎ，Ｎｅｓｔｉｎ邋表达量飞悔．．ａ邋ａｍ，逡逑是成釉细胞；ｏｄ，是成牙细胞。逡逑ｃ逡逑．0邋Ａ邋Ａ邋逦逡逑＜／＞邋１逦W邋Ｃｏｎｌｒｏｌ逡逑￥邋１邋２逦ｍ邋Ｗｆｓ＾１１＾＇９逡逑ｌｌＵ．Ｕｉｌ？ｌｉｌ逡逑Ｚ邋＿１。垆妒邋ＤｓｐＰ逦Ｃ0＇１？Ａ邋0ｓｔｅ＾邋0ｅｃ0＾邋＾逡逑图２．２邋Ｑ－ＰＣＲ方法分析对照组和Ｗ／／Ｗｉ＿ｃ＞ｅ小鼠在鼠ｐ0时Ａ；批／ｏｇｅ？／ｎ、逡逑Ｄｓ／７／？、Ｃ＜７Ｗａ＿／、（７你ｒ／ｘ、Ｄｅｃｏｒａ邋ａｍｉｉＶｅｓｔ／ｎ邋这几个基因表达均降低。逡逑女邋Ｐ＜０．０５。逡逑２８逡逑
【学位授予单位】：杭州师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：Q95-33

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1 韩波;杨U

本文编号：2642029