邻苯二甲酸二甲酯（DMP）对斑马鱼（Dauio rerio）的毒性作用机制探究

发布时间：2020-08-12 23:08

【摘要】：邻苯二甲酸酯(PAEs)是通常被用于添加在塑料制品中,使塑料变得柔软富有弹性的一类化学添加剂,由于塑料制品和个人护理用品的广泛使用而进入生物体和环境中,近年来由于其在较低的浓度下就能引起一系列机体内反应的内分泌干扰物效应而受到国内外学者广泛的关注。邻苯二甲酸二甲酯(DMP)是PAEs中最常见的一种,也是结构最简单,分子量最小的一种,由于通常认为PAEs的毒性与侧链基团的大小呈正相关,所以对DMP的毒性研究较其他常见PAEs来说相对较少。但DMP已被列为最优先被控制的污染物之一,且DMP在进入生物体后的第一级代谢产物邻苯二甲酸单酯具有更高的毒性,所以应引起关注。斑马鱼作为一种模式生物,由于其种种优越性成为研究毒性机理的优良生物模型。为了进一步探究DMP的毒性作用机制,选用斑马鱼作为生物模型,研究邻苯二甲酸二甲酯在短期急性暴露和长期慢性暴露下,对斑马鱼的毒性作用。在短期急性暴露中测定了DMP的半致死浓度LC50,并分别从蛋白和分子水平上测定了斑马鱼在氧化应激、能量代谢和免疫方面的生物标志物变化。在不同DMP浓度暴露下测定了超氧化物歧化酶、过氧化氢酶的酶活变化和谷胱甘肽、丙二醛的含量变化,发现随着DMP浓度的升高,SOD、CAT、GSH均呈现先升高后下降的趋势,MDA的含量则先基本不变后又上升。在分子水平上通过实时荧光定量PCR测定了氧化应激、能量代谢和免疫相关基因的表达量变化情况。结果表明,DMP会对氧化应激有关基因的表达量产生影响,从而引起氧化损伤;并会造成有氧糖代谢途径向无氧糖酵解途径转化,同时引起非特异性免疫功能的下降。在长期毒性暴露中,选取30d、60d和90d三个时间点测定了斑马鱼体重的变化,并从分子水平上检测了关于斑马鱼调控甲状腺激素分泌的下丘脑-垂体-甲状腺(HPT)轴相关基因的表达,发现环境浓度下DMP的长期暴露会引起斑马鱼的甲状腺功能的紊乱。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：X171.5
【图文】：

力逡逑在邋０，邋５，１０，１５，邋２０，２５，邋３０，邋３５，４０，４５邋ｍｇ／Ｌ邋的邋ＤＭＰ邋浓度梯度下，９６ｈ逡逑暴露的斑马鱼ＳＯＤ和ＣＡＴ酶活力如图２和图３所示。其中ＳＯＤ酶活力在１５邋ｍｇ／Ｌ逡逑达到最大值３１６．４７邋Ｕ／ｇ邋（抑制ＮＢＴ光化还原的５０％为一个酶活性单位），ＣＡＴ酶逡逑活力在２５邋ｍｇ／Ｌ达到最大值５１５．５６邋Ｕ／ｇ邋？邋ｍｉｎ邋（以ｌｍｉｎ内Ａ２４Ｑ减少０．１的酶量为逡逑一个酶活单位），两种酶均呈现先上升后下降的趋势。逡逑４００逡逑３５０邋－逦Ｔ逦＾邋ＳＯＯ逡逑０逦５逦１０逦１５逦２０逦２５逦３０逦３５逦４０逦４５逡逑ＤＭＰ浓度（ｍｇ／Ｌ）逡逑图２不同ＤＭＰ浓度暴露下斑马鱼的ＳＯＤ酶活力逡逑Ｆｉｇ．邋２邋ＳＯＤ邋ｅｎｚｙｍｅ邋ａｃｔｉｖｉｔｙ邋ｏｆ邋ｚｅｂｒａｆｉｓｈ邋ｅｘｐｏｓｅｄ邋ｔｏ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＤＭＰ逡逑逦２２逦逡逑

Ｆｉｇ．邋３邋ＣＡＴ邋ｅｎｚｙｍｅ邋ａｃｔｉｖｉｔｙ邋ｏｆ邋ｚｅｂｒａｆｉｓｈ邋ｅｘｐｏｓｅｄ邋ｔｏ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＤＭＰ逡逑斑马鱼在不同急性暴露时期肝脏的超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和谷胱甘肽转移逡逑酶（ＧＳＴ）活性变化如图４和图５所示。其中０为对照组，Ｌ、Ｍ、Ｈ分别为低浓逡逑度、中浓度、高浓度。逡逑３０邋ｒ逡逑Ｈ２４ｈ逡逑＾邋２５逦煖逡逑Ｉ邋２０邋－逦Ｉ逦0９６ｈ逡逑ｆ逦：逡逑ｗ邋１５邋－逦ｊ逦ＩＢ逡逑宏广ｉ逦Ｉｎ逡逑？邋１０邋－邋Ｔ逦｜逦、逡逑０１邋ｂ：丨WＩ逦ｐｔｊｎ邋ｎW邋ｕ＿逡逑０逦Ｌ逦Ｍ逦Ｈ逡逑图４斑马鱼在急性暴露不同时期肝脏ＧＳＴ酶活性逡逑Ｆｉｇ．邋４邋Ｌｉｖｅｒ邋ＧＳＴ邋ａｃｔｉｖｉｔｙ邋ｉｎ邋ｚｅｂｒａｆｉｓｈ邋ａｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｓｔａｇｅｓ邋ｏｆ邋ａｃｕｔｅ邋ｅｘｐｏｓｕｒｅ逡逑逦２３逦逡逑

Ｆｉｇ．邋７邋Ｃｈａｎｇｅｓ邋ｏｆ邋ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ邋ｃｏｎｔｅｎｔ邋ｉｎ邋ｚｅｂｒａｆｉｓｈ邋ｅｘｐｏｓｅｄ邋ｔｏ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＤＭＰ逡逑３．４邋ＳＯＤ酶非变性电泳结果逡逑斑马鱼全鱼组织的ＳＯＤ酶的非变性电泳如图８￣１０所示。无抑制剂处理时可逡逑见三条ＳＯＤ同工酶条带，条带的亮度所反映的酶活性趋势与ＳＯＤ活性检测趋势逡逑相一致。样品经乙醇－氯仿处理后可见三条同工酶条带，由于上样量较少故条带逡逑较窄；经双氧水处理后则无条带出现。逡逑［肩，丨，．Ｉ邋一『养…－－逡逑逦邋ｓｏｄｌ逡逑［ｉ，逦＇ｉ邋＂逦；逦？■ｉ逦９Ｄｄ２逡逑Ｉ逦ｆ逦－邋？逦ｙ逦—逦，逡逑０邋５邋１０邋１５邋２０邋２５邋３０邋３５邋４０邋４５逡逑V：媭：＇逦ＤＭＦＷ度（ｍｇ／Ｌ）逦二逡逑图８邋ＳＯＤ酶不加抑制剂时的活性酶谱逡逑Ｆｉｇ．邋８邋Ｎａｔｉｖｅ－ＰＡＧＥ邋ｚｙｍｏｇｒａｍ邋ｏｆ邋ＳＯＤ邋ｗｉｔｈｏｕｔ邋ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ逡逑逦２５逦逡逑

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 臧晓霞;纪明山;左平春;陈仕红;孙中华;杜芳;;啶酰菌胺对斑马鱼胚胎及成鱼的毒性[J];农药;2016年12期

2 沈自慧;杨淋清;吴德生;郭昱嵩;袁建辉;周丽;刘建军;庄志雄;;基于斑马鱼胚胎进行化学品毒性评价的方法[J];中国热带医学;2016年12期

3 王鸿奎;巩杰;王新;刘东;;非肌性肌球蛋白Ⅱ-C在斑马鱼胚胎发育过程中的表达[J];交通医学;2016年01期

4 郭樱子;栾亚楠;周玉玲;白承连;任湘鹏;;低剂量氯氟氰菊酯对斑马鱼胚胎运动行为的影响[J];温州医科大学学报;2016年07期

5 赵崇军;田敬欢;倪媛媛;冯娅茹;代一航;王金凤;樊娇娇;杨冉;马志强;林瑞超;;马钱子对斑马鱼胚胎发育的影响[J];中华中医药学刊;2016年11期

6 刘迎;胡燕;姜蕾;潘波;秦涵淳;林勇;;6种表面活性剂对斑马鱼胚胎发育的毒性效应[J];生态毒理学报;2014年06期

7 何秋霞;董贞兰;楚杰;孙桂金;韩利文;韩健;刘可春;;芦荟大黄素对斑马鱼胚胎发育及运动行为学的毒性研究[J];山东科学;2015年03期

8 陈怡君;蒲韵竹;颜慧;钟玉绪;王卓;李春杰;查晓丹;赵宝全;刘萍;;冰片对斑马鱼胚胎发育的安全性评价[J];中国药房;2014年19期

9 刘迎;胡燕;姜蕾;潘波;秦涵淳;林勇;;5种酰胺类除草剂对斑马鱼胚胎发育的毒性效应[J];农药;2014年11期

10 王雪;彭维兵;王希敏;刘可春;陈锡强;张云;;富马酸二甲酯对斑马鱼胚胎早期发育的影响[J];动物学杂志;2013年04期

相关会议论文 前10条

1 沈自慧;吴德生;郭昱嵩;;基于斑马鱼胚胎进行化学品毒性评价的方法[A];2016年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2016年

2 陈锡强;韩利文;王希敏;王思锋;侯海荣;刘可春;;促渗剂氮酮对斑马鱼胚胎的透皮作用及其毒性影响(英文)[A];2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周论文集[C];2012年

3 张利军;郭家彬;苑晓燕;史慧勤;赵君;束玉磊;彭双清;;应用斑马鱼胚胎和幼鱼评价布洛芬的心脏毒性[A];2013年（第三届）中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛论文摘要[C];2013年

4 侯佳;桂永浩;张立凤;王跃祥;宋后燕;钟涛;;视黄酸缺乏对斑马鱼胚胎心脏发育的影响[A];中华医学会第五次全国儿科中青年学术交流大会论文汇编（上册）[C];2008年

5 常成;朱加进;孙启;;瓶装水对斑马鱼胚胎生长发育的影响[A];2017浙江省营养学会年会暨西湖营养学术论坛资料汇编[C];2017年

6 于永利;杨景峰;王思珍;董武;;高残留农药福美双对斑马鱼胚胎体节以及脊索的影响[A];持久性有机污染物论坛2010暨第五届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集[C];2010年

7 巴雅斯胡;杨景峰;于永利;王思珍;董武;;高残留农药代森锌诱导斑马鱼胚胎脊索变形[A];持久性有机污染物论坛2011暨第六届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集[C];2011年

8 杨维超;苑晓燕;张利军;吴卫东;彭双清;;纳米二氧化硅致斑马鱼胚胎发育毒性的初步研究[A];2014线粒体毒性与基于毒性通路的安全性评价新策略学术研讨会暨中国毒理学会毒理学替代法与转化毒理学专业委员会成立大会论文集[C];2014年

9 涂文清;徐超;刘维屏;;乙草胺对于斑马鱼胚胎在发育和免疫毒性方面的对映体选择性[A];第四届全国分子手性学术研讨会暨2011绿色手性论坛论文摘要集[C];2011年

10 朱小山;朱琳;李燕;端正花;;富勒烯(C_(60))对斑马鱼胚胎发育毒性的初步研究[A];第三届全国环境化学学术大会论文集[C];2005年

相关重要报纸文章 前6条

1 实习生 杨阳;斑马鱼可为癌症病人试药[N];科技日报;2017年

2 记者 张梦然;燃煤中发现未知潜在毒副产品[N];科技日报;2017年

3 记者 刘霞;科学家绘出首个脊椎动物发育蓝图[N];科技日报;2008年

4 记者 陈丹;研究发现一些3D打印物品有毒[N];科技日报;2015年

5 记者 毛黎;2008年10大科学突破[N];科技日报;2008年

6 本报驻日内瓦记者 陈建;“中国创新”领跑日内瓦发明展[N];经济日报;2015年

相关博士学位论文 前10条

1 谢华平;利用斑马鱼模型研究Pygo1与fhlA基因的发育生物学功能[D];湖南师范大学;2012年

2 倪睿;Hars非经典功能调控斑马鱼血管发育机制研究[D];西南大学;2018年

3 熊舒婷;miR-200家族在斑马鱼生殖发育中的功能研究[D];华中农业大学;2018年

4 路畅;Dmrt2a和igf2bp1在斑马鱼胚胎发育中的功能研究[D];华中农业大学;2017年

5 邢延奕;斑马鱼dishevelled家族基因调节胚胎图式形成和原肠运动的突变分析[D];山东大学;2018年

6 肖超强;利用斑马鱼探讨氟喹诺酮结构与毒性的关系研究[D];北京协和医学院;2018年

7 施旭来;miR-129-3p在斑马鱼胚胎中的神经保护作用及其机制研究[D];山东大学;2018年

8 黄志斌;c-Myb和C/ebpl在斑马鱼粒细胞发育及疾病形成中的机制研究[D];南方医科大学;2015年

9 康桂英;对乙酰氨基酚在斑马鱼体内的毒性研究[D];内蒙古农业大学;2017年

10 张维红;两种多发性骨髓瘤斑马鱼模型的建立及初步应用[D];天津医科大学;2016年

相关硕士学位论文 前10条

1 王恒琦;TCIPP和TCEP对斑马鱼胚胎/仔鱼神经发育的影响研究[D];武汉科技大学;2019年

2 王露洁;邻苯二甲酸二甲酯（DMP）对斑马鱼（Dauio rerio）的毒性作用机制探究[D];山东大学;2019年

3 宋明霞;重金属铜对斑马鱼胚胎发育毒性作用的研究[D];烟台大学;2019年

4 刘聪聪;斑马鱼模型中睾酮对PCOS易感基因表达及生育行为的影响[D];山东大学;2019年

5 高彦杰;两种Bt蛋白及转cry1C基因水稻对斑马鱼的安全评价[D];中国农业科学院;2019年

6 张文超;阿帕替尼联合化疗对A549肺癌斑马鱼移植瘤模型的抗肿瘤效应及机制研究[D];上海交通大学;2017年

7 吕亚旗;UNC5C在淋巴管系统发育中的作用研究[D];厦门大学;2017年

8 于翠霞;斑马鱼病原菌的鉴定和药物敏感性分析[D];华中师范大学;2017年

9 张意;富硒螺旋藻对高效氯氰菊酯染毒斑马鱼生殖和发育保护作用的研究[D];安徽大学;2019年

10 刘广夫;铜绿微囊藻对斑马鱼的毒性作用机制研究[D];浙江工业大学;2018年

本文编号：2791148