鼠李糖乳杆菌胞外多糖滴丸开发

发布时间：2020-08-13 01:38

【摘要】：乳酸菌胞外多糖(Exopolysaccharide,EPS)是一些乳酸菌在生长阶段分泌出的次生代谢产物,具有抗氧化、抗肿瘤、清除胆固醇、提高免疫力、调节肠道菌群等众多益生功能。乳酸菌胞外多糖理化性质稳定、无毒无害,故可作为天然食品添加剂改善乳制品的流变性、乳化性、黏着性和质构,还能改善焙烤类食品的保水性。本研究在实验室前期研究的基础上,对鼠李糖乳杆菌BMBL0606胞外多糖提取工艺进行优化,并对其进行提取率测定、成分分析和抗氧化能力测定;对提取得到的粗EPS进行分离纯化得到单一组分,并进行光谱分析、抗氧化活性测定;最后利用鼠李糖乳杆菌胞外多糖作为有效活性成分制备抗氧化滴丸,对其制备过程中的基质配比和滴制温度进行优化,分析其多糖含量、溶出速度和抗氧化活性。结果如下:1.胞外多糖提取工艺优化:1)除蛋白工艺中,聚酰胺法要优于三氯乙酸法,最佳的聚酰胺添加量为120 g/L,最佳的除蛋白时间为4 h;2)在醇沉工艺中,最佳的浓缩倍数为浓缩至原体积的20%,最佳的初始pH为7,最佳的乙醇添加量为4倍体积95%乙醇,最佳的醇沉时间为12 h;3)在最佳条件下,EPS提取率可达15.5 g/L发酵液,其中总糖占74.07%、蛋白质占1.19%、脂肪占0.76%、总酚占0.12%;4)20 mg/mL EPS总抗氧化能力相当于0.57 mM Trolox,Abts.~+清除率为69.46%。2.胞外多糖的分离纯化:粗EPS经过DEAE-52纤维素离子交换柱后被分离成三个组分,分别命名为EPS-1、EPS-2、EPS-3。EPS-1在体外有较强的清除DPPH、OH、Abts.~+自由基能力,而EPS-2的抗氧化能力较弱。3.抗氧化滴丸的开发:1)EPS滴丸的最优基质配比为PEG 2000:6000=1:1,最优滴制温度为75℃,此条件下滴丸成型率达到98.1%,平均丸重为0.022 g,丸重差异和溶散时限均在《中国药典》规定范围之内;2)在最佳条件下制得的滴丸总糖含量为17.17 mg/g;3)DPPH自由基半数清除浓度(IC_(50))为227.32 mg/mL,OH自由基IC_(50)为43.15 mg/mL。综上所述,本研究通过对鼠李糖乳杆菌胞外多糖的提取工艺进行优化,提高了成品的品质和得率;对最优提取工艺下得到的胞外多糖进行分离纯化,分析单一组分的结构和抗氧化活性,为日后鼠李糖乳杆菌胞外多糖在食品、医药行业中的应用提供依据;优化了胞外多糖滴丸的制备工艺,对其物理性质和抗氧化活性进行分析,为未来工业化大规模生产抗氧化滴丸提供参考。
【学位授予单位】：辽宁大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TS201.3
【图文】：

方法,自由基,自由基清除能力,蛋白质变性

PS 浓度的提高，DPPH 自由基清除能力逐渐提高，PA 法 DPPH 自由基活性始终高于 TCA 法除蛋白。这是由于蛋白质变性、凝聚成沉淀的过程中，也会打破 EPS 的原性，还会降低 EPS 提取率。PA 法是利用吸附作用去除蛋构、活性影响较小。图 1-1 两种除蛋白方法对 EPS 清除 DPPH 自由基能力的影响

紫外吸收光谱,方法,自由基,糖结构

着 EPS 浓度的提高，DPPH 自由基清除能力逐渐提高，PA 法除蛋S 清除 DPPH 自由基活性始终高于 TCA 法除蛋白。这是由于 TCA在使蛋白质变性、凝聚成沉淀的过程中，也会打破 EPS 的原有结其活性，还会降低 EPS 提取率。PA 法是利用吸附作用去除蛋白质糖结构、活性影响较小。图 1-1 两种除蛋白方法对 EPS 清除 DPPH 自由基能力的影响

影响图,添加量,聚酰胺,剩余蛋白

清除率随 PA 添加量的提高而升高（见图 1-3），PA 添加量率的增长显而易见，大于 120 g/ L 时增长速度渐缓。故加量，此时发酵液中剩余蛋白质浓度为 47.38 μg/ mL理时间对除蛋白效果的影响图 1-3 聚酰胺添加量对除蛋白效果的影响

【参考文献】