睾丸酮丛毛单胞菌中KAR的生物学功能及调控研究

发布时间：2020-10-20 15:30

　　 睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)是一种能够降解甾体类激素的革兰氏阴性细菌,因其在环境修复中有重要的生物学作用,国内外专家学者对其在菌体细胞与环境、菌体内代谢酶、菌体基因之间相互作用等进行了广泛研究。本文以睾丸酮丛毛单胞菌中短链脱氢酶KAR为研究对象,通过敲除菌株构建、甾体类激素诱导、高效液相色谱分析、质粒共转化等方法研究KAR基因对五种甾体类激素的降解作用,同时研究了睾丸酮丛毛单胞菌中三种调控蛋白对KAR的生物学调控作用。实验结果表明:通过HPLC检测野生型和KAR敲除突变的睾丸酮丛毛单胞菌激素降解情况,激素分别诱导14小时后,各种激素的残留量呈现出明显的差距。其中突变菌株中睾丸酮残留量要高于野生型43%左右;雌酮残留量要高于野生型37%左右;孕酮雌酮残留量要高于野生型28%左右,而雌二醇和甲睾酮分别相差9%和8%。睾丸酮丛毛单胞菌KAR基因敲除以后其降解甾体类激素的能力受到了影响,影响程度上睾丸酮雌酮孕酮雌二醇甲睾酮。通过将含有三种调控蛋白的重组质粒与含启动子的KAR重组质粒共转化到BL21菌株中,激素诱导后,ELSA检测结果为,LuxR与KAR的共转化菌中,KAR表达量明显上升;LysR与KAR的共转化菌中,KAR表达量下降;TetR与KAR的共转化菌中,KAR表达量无明显变化。本文实验结果对于进一步研究KAR酶在睾丸酮丛毛单胞菌中甾体类激素代谢作用及调控研究提供实验基础。
【学位单位】：长春理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：Q935
【部分图文】：

图 2.1 KAR 目的基因 PCR 电泳结NA Marker DL2000； 1：KAR 目的基stosteroni 为模板进行 PCR 反 786 bp，说明成功扩增出 K-T-KAR 载体鉴定R 载体构建结果

图 2.1 KAR 目的基因 PCR 电泳结果图M： DNA Marker DL2000； 1：KAR 目的基因 PCR 产物 C. testosteroni 为模板进行 PCR 反应扩增出 K量约为 786 bp，说明成功扩增出 KAR 基因片D18-T-KAR 载体鉴定T-KAR 载体构建结果

图 2.3 pMD18-T-KAR PCR 鉴定电泳结果：DNA Marker DL2000；1：KAR 目的基因 PCR功构建的重组质粒 pMD18-T-KAR 的目标基因（786 bp）相同的片段。图 2.4 pMD18-T-KAR 双酶切鉴定电泳结
【参考文献】

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本文编号：2848853