米曲霉脂肪酶的基因表达、酶学性质及分子改造研究

发布时间：2020-12-04 01:53

　　脂肪酶（lipase,EC3.1.1.3）属于羧基酯水解酶类,用于催化水解三酰甘油,广泛存在于自然界中,其中微生物是脂肪酶的重要来源。目前对酵母、曲霉、假单胞菌、青霉、根霉等产脂肪酶的微生物研究较多。本课题主要研究的对象是米曲霉来源的脂肪酶,我们从NCBI数据库（Genbank）中选择了8种米曲霉脂肪酶基因,进行目标基因的人工合成并在大肠杆菌中实现异源表达。论文对脂肪酶酶活最高的脂肪酶基因进行分子改造,进一步提升其酶活性,并对获得的脂肪酶突变体的酶学性质进行了研究,研究结果如下:1、首先成功在大肠杆菌中表达了8种米曲霉脂肪酶基因,并对其基本酶学性质进行了研究。对根据大肠杆菌密码子偏好性优化的8种米曲霉脂肪酶基因进行人工合成,连接在质粒pET-28a（+）中,并在大肠杆菌E.coli BL21（DE3）中实现表达,成功构建8株重组脂肪酶工程菌。将这8株工程菌进行摇瓶发酵,离心获得菌体,经超声破碎后得到8种重组脂肪酶的粗酶液,并测定其水解活性,发现经过实验室前期挖掘和研究的AOL-3的酶活力最高,为521.12 U/g。实验对8种脂肪酶的最适温度、pH以及底物特异性进行了初步研究,发现米曲... 

【文章来源】：浙江工业大学浙江省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

脂肪酶催化机理Figure1-1.Thelipasecatalysismechanism

图 2-3 质粒提取的凝胶电泳图Figure 2-3. Agarose electrophoresis map of plasmidLane M:2K plusⅡMarker; lane 1-2：Plasmid of pET-28a(+)-aol-(1米曲霉脂肪酶基因表达的 SDS-PAGE 验证-PAGE 是聚丙烯酰胺凝胶电泳，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持泳技术，用于分离和分析蛋白质。8 种米曲霉经过摇瓶诱导发进行 SDS-PAGE 分析，与诱前进行比较，如图 2-4 所示。

图 2-3 质粒提取的凝胶电泳图Figure 2-3. Agarose electrophoresis map of plasmidLane M:2K plusⅡMarker; lane 1-2：Plasmid of pET-28a(+)-aol-(1-8)曲霉脂肪酶基因表达的 SDS-PAGE 验证GE 是聚丙烯酰胺凝胶电泳，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介技术，用于分离和分析蛋白质。8 种米曲霉经过摇瓶诱导发酵行 SDS-PAGE 分析，与诱前进行比较，如图 2-4 所示。


本文编号：2896824