GATA4在RNA聚合酶Ⅰ和Ⅲ指导的基因转录中的作用

发布时间：2020-12-05 05:28

　　GATA4是锌指转录因子GATA结合蛋白家族的成员之一。GATA4最初作为心脏发育的调节因子被发现,随后研究发现GATA4参与调节动物体内各种基因的表达。GATA4除了调节心脏发育和转录也参与其它生物过程,其中包括癌细胞增殖。本实验室早期研究发现,细丝蛋白A（FLNA）对RNA聚合酶I（Pol I）和RNA聚合酶III（Pol III）基因转录有福调控作用,敲低FLNA促进肿瘤细胞增殖。最近的mRNA-seq分析表明,FLNA敲低增加SaOS2细胞中GATA4的表达;提示GATA4可能参与调节Pol I和Pol III指导的基因转录。为证明这一推测,我们制备了GATA4 shRNA瞬时表达细胞和稳定表达细胞系,采用RT-qPCR和Western Blot的方法探究FLNA对敲低细胞系中Pol I和Pol III的基因表达和细胞增殖的影响。结果表明,GATA4敲低抑制Pol I和Pol III基因转录和细胞增殖。进一步对GATA4调节Pol I和Pol III基因转录机制分析表明,GATA4敲低抑制Pol I特异性转录因子RRN3和UBF1的表达以及Pol III特异性转录因子BRF1和... 

【文章来源】：武汉科技大学湖北省

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 研究意义
    1.2 研究现状
        1.2.1 细丝蛋白（filamins）
        1.2.2 FLNA生物功能
        1.2.3 GATA家族
        1.2.4 GATA4 与发育和疾病发生
        1.2.5 GATA4与癌症
        1.2.6 RNA聚合酶Ⅲ基因转录与癌症
    1.3 本课题产生的依据和研究目标
第2章 实验材料与方法
    2.1 主要材料和仪器
        2.1.1 实验所需的细胞和质粒
        2.1.2 实验耗材
        2.1.3 实验试剂
        2.1.4 实验仪器
        2.1.5 相关试剂溶液的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 基因克隆
        2.2.2 细胞培养、细胞瞬时转染及稳定表达细胞系的建立
        2.2.3 实时荧光定量PCR（RT-qPCR）
        2.2.4 Western Blot
        2.2.5 荧光素酶测定
    2.3 实验数据处理
第3章 实验结果
    3.1 FLNA敲低后增强GATA4 的表达
    3.2 GATA4 shRNA 瞬时表达降低部分 Pol Ⅰ 和 Pol Ⅲ基因转录
    3.3 GATA4 shRNA稳定细胞系的建立
    3.4 GATA4 shRNA稳定表达降低部分Pol Ⅰ和 Pol Ⅲ转录产物的表达
    3.5 GATA4 shRNA稳定表达抑制细胞增殖
    3.6 GATA4 敲低减少RRN3和UBF1 的表达
    3.7 GATA4 敲低减少BRF1和TFIIIC2 的表达
    3.8 BRF1和TFⅢC2 启动子活性检测
    3.9 SP1 敲低影响GATA4 表达、GATA4 影响SP1 表达
第4章 结论与展望
致谢
参考文献
附录1 攻读硕士学位期间发表的论文
附录2 攻读硕士学位期间参加的科研项目



本文编号：2898963