菠菜SpoHIPP39基因的克隆及其逆境应答

发布时间：2020-12-05 13:21

　　重金属相关的异戊二烯化蛋白（heavy metal associated isoprenylated plant protein,HIPP）,属于植物金属伴侣蛋白,该类蛋白主要在植物细胞的重金属稳态和解毒机制中发挥重要作用,同时发现可能是响应非生物胁迫转录反应中的调节元件。对该类基因在逆境应答的分析,可为植物逆境耐受性的研究提供理论资料。本研究从菠菜转录组数据库中获得SpoHIPP39基因的cDNA全长,共计1747 bp,其中最大开放阅读框为519 bp,编码蛋白为172个氨基酸,具有HMA保守结构域和异戊二烯化基序。利用PCR技术获得SpoHIPP39基因的cDNA全长,以该基因编码的氨基酸序列和已知的拟南芥HIPP蛋白序列为依据建立HIPP蛋白家族的（Hidden Markov Model,HMM）模型,通过建立的模型进行菠菜转录组数据库搜库,确定34个菠菜HIPP家族蛋白。对于该家族成员分析,预测均不含有跨膜区域和信号肽,认为该家族蛋白均为胞内蛋白。通过将SpoHIPP39基因构建至带有绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein,GFP）的pBI121-G... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

SpoHIPP39基因全长的PCR验证Fig.3-2Full-lengthcDNAsequenceamplificationofSpoHIPP39byPCR

结果与分析与分析菜SpoHIPP39基因cDNA全长的获得菜 Sp75 品系 RNA 的获得生长状态良好的成熟期菠菜，取叶片提取菠菜总RNA，进行琼超微量分光光度计测定总RNA浓度以及RNA纯度。如图所示，为0.78μg/μL和0.70μg/μL，其中28SrRNA与18SrRNA亮度比值260/A280比值分别为1.99、1.98，证明菠菜叶片总RNA纯度很高，以作为下一步实验样本。1 2

东北农业大学理学硕士学位论文2 菠菜SpoHIPP基因家族的生物信息学分析2.1 菠菜 SpoHIPP39 基因 cDNA 全长的序列分析菠菜SpoHIPP39基因cDNA全长共519bp，编码172个氨基酸。红框处为异戊二烯化色框处为编码HMA保守结构域序列。该基因编码的蛋白质符合HIPP蛋白特性，属于H ， 其氨 基 酸序 列 进行BLASTp分 析， 确 定为 菠 菜 SpoHIPP39 蛋 白， NCBI序 列_021850468.1。理论分子量为19.9kDa，等电点为6.69。ATGAAGAAAATAGTGTTGAAATTGGATTTGCATGATGACAAGGCGAAGCAAAAAGCTCTT


本文编号：2899515