内切葡聚糖酶BcsZ在大肠杆菌中的分泌机制探究

发布时间：2020-12-23 14:35

　　内切纤维素酶在生物化学工业中发挥着无比重要的作用,例如医药、食品和生物燃料等行业。它们可以从许多种生物体中分泌到细胞外,然而,其分泌机制很少受到关注。先前的研究表明,大肠杆菌内源性内切葡聚糖酶BcsZ可以从大肠杆菌DH5α中分泌到细胞外,但是其分泌机制仍一无所知。我们的主要工作是对其分泌机制进行进一步的探究。我们证明了BcsZ在胞外的积累是一种特异性的分泌活动,而不是由大肠杆菌细胞裂解造成的。此外,BcsZ的分泌是以周质空间为中转站的两步过程。BcsZ的N末端存在一个由21个氨基酸残基组成的典型信号肽,它对于转运是必需的,但我们证明其跨内膜并不依赖Sec和TAT途径。我们推测可能存在某些未知的信号肽依赖性孔道蛋白可以介导BcsZ的跨膜转运。同时,我们对BcsZ的跨外膜转运进行了初步的探索,但未得到明确的结论。为了探究BcsZ跨内膜转运的具体机制,我们开发了一种生长偶联的筛选策略以在大肠杆菌全基因组突变文库中寻找影响其分泌的基因。通过将靶蛋白与来自枯草芽孢杆菌的果聚糖蔗糖酶(SacB)融合,实现了蛋白定位与蔗糖敏感性的精确偶联。最终,我们通过这种筛选系统两个关键蛋白DnaK和CRP。作为... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．７ＢｃｓＺ跨膜转运的能量分析（ａ）收集诱导４小时后的￡．ｍ／／ＤＨ５ａ／ｐＴｒｃ－６ｃ９Ｚ细胞，除??


本文编号：2933878