基于CRISPR/Cas9类植物乳杆菌基因编辑载体构建及电转化条件研究

发布时间：2020-12-29 23:02

　　类植物乳杆菌（Lactobacillus paraplantarum）,是一种具有多种益生特性的乳酸菌。随着基因编辑技术的发展,人们对类植物乳杆菌不再是仅局限于基本的生理性能的探究,对其遗传操作的研究是目前研究的热点内容。目前已有研究表明CRISPR/Cas技术可用于乳酸菌的基因编辑。由于类植物乳杆菌复杂且致密的细胞壁结构,使得外源质粒的转入变得困难,限制其遗传操作的研究。因此本研究将从构建CRISPR/Cas基因编辑载体和探究转化条件两方面着手。本研究以质粒pLCNICK、pLP-gba为基础,从质粒pLCNICK上扩增出Cas9启动子片段和红霉素抗性基因终止子片段,与从质粒pLP-gba扩增的LP404142融合基因CDS区片段,通过Easy Geno快速重组克隆方法克隆到线性pUC19载体上,命名为质粒A。然后从质粒pLCNICK上扩增出包含卡那霉素抗性基因-gRNA基因的长片段,和包含启动子与终止子的红霉素抗性基因片段,克隆到线性pUC19载体上,命名为质粒B。最后把质粒A上启动子-LP404142-终止子片段与质粒B上卡那霉素-gRNA-红霉素基因片段和质粒pLCNICK的C... 

【文章来源】：河北经贸大学河北省

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

CRISPR/Cas基本结构

pLCNICK质粒图

图 3 pUC19 质粒图及仪器设备录表 1，仪器设备见附录表 2。基及溶液：购自天根生化科技有限公司。基：购自天根生化科技有限公司。（液体）：牛肉膏 10 g、蛋白胨 10 g、酵母膏 5 g、酸氢二铵 2 g、磷酸氢二钾 2 g、硫酸镁 0.58 g、硫酸


本文编号：2946496