小球藻中α-葡萄糖苷酶抑制成分的分离纯化及酶动力学的研究

发布时间：2021-01-25 05:18

　　从事这项研究工作的目的和重要性:基于目前生活条件变化和工作压力的增大,糖尿病患者的人数不断的增加,尤其是Ⅱ型糖尿病的许多方面仍是一个挑战,同时也促使他们在开发治疗糖尿病的疗法方面越来越具有创新性。小球藻除营养保健功效外,利用小球藻作为生物能源的生产原料也备受可再生能源领域的关注。随着人类研究的逐步深入,其潜在的营养和药用价值将被充分挖掘,开发利用小球藻资源必将前景广阔。研究表明小球藻中活性物质对人体大有益处,因此针对其对-葡萄糖苷酶的抑制活性作相关性研究。实验内容主要涉及小球藻中的活性物质的粗提取方法操作,经高压热水抽提,离心、萃取、旋蒸、过滤等,获得的含有活性物质的粗提样品的分析。再经过硅胶板薄层层析法的纯化,不断摸索展开剂的两相和比例,使之呈现出条带并确定含有活性的条带。小球藻活性物质的分离提取中,对有机溶剂的比例、萃取时间进行了优化。在进行薄层层析分离时,对展开剂的选择和比例做优化处理。对小球藻粗提物进行了体外模型酶抑制反应的活性初测试。对小球藻活性物质进行高效液相分析,从该物质中分离出四种化合物。并对四种化合物做酶抑制活性检测,对其中一种有a-葡萄糖苷酶抑制剂作用的化合物进行收... 

【文章来源】：上海师范大学上海市

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 小球藻及治疗糖尿病药物的研究与应用现状
        1.1.1 小球藻的概述
        1.1.2 小球藻的生物学特性
        1.1.3 小球藻的应用现状
        1.1.4 小球藻的药用价值
        1.1.5 糖尿病的四种类型及Ⅱ型糖尿病的主要用药
        1.1.6 治疗糖尿病的研究方法突破
    1.2 小球藻中活性物质及有效成分提取方法的研究进展
        1.2.1 小球藻中活性物质的研究现状
        1.2.2 有机溶剂的萃取
        1.2.3 薄层层析法
        1.2.4 葡聚糖凝胶柱
        1.2.5 HPLC高效液相色谱
    1.3 α-葡萄糖苷酶和抑制剂的概述及酶动力学方法研究
        1.3.1 α-葡萄糖苷酶的概述
        1.3.2 α-葡萄糖苷酶的来源
        1.3.3 α-葡萄糖苷酶的生物学功能
        1.3.4 α-葡萄糖苷酶抑制剂的研究现状
        1.3.5 α-葡萄糖苷酶抑制剂的作用原理机制
        1.3.6 酶促反应动力学的概述
        1.3.7 α-葡萄糖苷酶抑制剂的相关酶动力学研究方法
    1.4 本课题的立题背景及研究意义
第二章 小球藻中活性物质的初步分离提取及实验方案
    2.1 实验课题方案设计
    2.2 实验仪器与试剂
        2.2.1 实验原料、仪器
        2.2.2 实验试剂、材料
    2.3 实验方法
        2.3.1 活性物质的粗提取
        2.3.2 硅胶板薄层层析
    2.4 结果分析
        2.4.1 小球藻粉中活性物质粗提的制备结果
        2.4.2 有机溶剂的萃取结果
        2.4.3 硅胶板薄层层析的结果
    2.5 本章小结
第三章 活性物质分离的条件优化及酶活测试
    3.1 实验试剂与仪器
        3.1.1 实验材料、试剂
        3.1.2 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 样品中a-葡萄糖苷酶抑制剂的活性测试
        3.2.2 提取中沉淀大分子无水乙醇比例和时间的优化
        3.2.3 层析展开剂比例的优化
        3.2.4 硅胶粉的浸泡溶剂
        3.2.5 不同浓度的阿卡波糖酶活测试
    3.3 结果与分析
        3.3.1 样品中a-葡萄糖苷酶抑制剂的活性测试结果
        3.3.2 无水乙醇比例和时间的结果分析
        3.3.3 不同展开剂比例的结果
        3.3.4 硅胶粉的浸泡溶剂确定
        3.3.5 阿卡波糖酶活测试结果
    3.4 本章小结
第四章 HPLC液相谱图分析及目标化合物的收集
    4.1 实验试剂与仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 流动相最佳比例确定
        4.2.2 分离出四种活性物质的酶活测试
        4.2.3 粗提物薄层层析的液相图
        4.2.4 收集的目标产物纯度检测
    4.3 实验结果与分析
        4.3.1 提取的小球藻中活性物质色谱图
        4.3.2 四种活性物质的酶活测试
        4.3.3 粗提物薄层层析的液相图结果分析
        4.3.4 目标产物的纯度优化结果
    4.4 本章小结
第五章 活性化合物的核磁谱图
    5.1 实验仪器与试剂
    5.2 目标产物的核磁谱图
    5.3 目标产物的质谱图
    5.4 结果分析
    5.5 本章小结
第六章 活性物质与酶的反应动力学研究
    6.1 实验试剂与仪器
    6.2 实验方法
        6.2.1 可逆与不可逆抑制类型的测定
        6.2.2 酶促反应的条件优化
        6.2.3 可逆抑制作用的竞争类型
        6.2.4 利用作图法求Km
    6.3 实验结果
        6.3.1 可逆抑制类型的确定
        6.3.2 最佳酶促反应OD值变化趋势
        6.3.3 抑制剂竞争类型的测试结果
        6.3.4 动力学参数Km值
    6.4 本章小结
第七章 结论与展望
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢



本文编号：2998646