芳香烃受体核转运子（ARNT）促进骨骼肌再生的作用机制研究与应用

发布时间：2021-02-20 16:45

　　研究背景和目的:骨骼肌的再生是修复骨骼肌损伤的关键。随着年龄的增长,骨骼肌再生能力明显下降,而骨骼肌再生的关键——低氧通路,其活性也受到抑制。目前科学界对于低氧通路导致骨骼肌再生能力下降的机制仍然缺乏完整的认识。有研究表明芳香烃受体核转运子（ARNT）是低氧通路中的关键组成部分,可能是调控骨骼肌再生的关键。本研究旨在探索骨骼肌再生机制,为提高老龄人口骨骼肌再生效率,寻找促骨骼肌再生方法提供理论依据。方法:1.分析衰老对骨骼肌再生能力的影响选用幼龄鼠与老龄鼠分别构建骨骼肌冰冻损伤模型,于术后第5、10天取材。HE染色再生肌纤维横截面积以量化骨骼肌再生能力;使用ELISA、Western、qRT-PCR、PCR芯片分析低氧通路、Notch通路、骨骼肌再生相关基因的表达变化;免疫荧光染色、多普勒超声用以评估小鼠下肢血流情况;提取骨骼肌前体细胞（SMPs）进行体外诱导以探究不同年龄来源成肌细胞数量及分化差异。2.探索ARNT在骨骼肌再生过程中的作用与机制采用siRNA技术使C2C12细胞系中的ARNT基因沉默并观察细胞分化差异及相关因子的表达变化;构建骨骼肌特异性敲除ARNT基因的转基因小鼠,... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：116 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－１．小鼠骨骼肌冰冻损伤模型的制备

所有获得的统计数据均用平均值士标准误（ｎｉｅａｎ±ＳＤ）表示。数据进行方??差分析（ＡＮＯＶＡ），以确定两个平均值之间的统计意义。ｐ值＜０．０５有统计学意??义。??１．３结果??１．?３．?１幼龄鼠与老龄鼠的肌纤维横截面积在非损伤条件下的对比??为了更好的评估不同组别之间的差异，本实验首先选取非损伤条件下的幼龄??鼠和老龄鼠的胫骨前肌，切片后进行ＨＥ染色并计算平均肌纤维横截面积。结果??显示二者之间无统计学差异。??

冰冻损伤，于损伤后第５天和第１０??天取材，对所取材的胫骨前肌进行ＨＥ染色并计算其中再生肌纤维的面积。ＨＥ??染色片中可见同一取材时间点，幼龄鼠的冉生骨骼肌肌纤维面积要显著大于老??龄鼠，老龄鼠的骨骼肌再生区域内可见更多的炎性细胞，甚至出现局部坏死。??统计显示幼龄鼠的骨骼肌再生肌纤维面积在损伤后第５天和第１０天的统计中都??明显大于老龄鼠（ｐ＜〇．?０００１），提示幼龄鼠损伤后的骨骼肌再生能力要优于老??龄鼠。??Ａ?Ｒ??ｎ?Ｙｏｕｎｇ?Ｏｌｄ?＾?Ｙ??戀＿??图１：丨．冰冻损伤后第５天和第１０天，幼龄鼠与老龄鼠的肌纤维横截面积对比。??（Ａ）幼龄鼠（ｎ＝８，?８－丨０周，雌雄各半）与老龄鼠（ｎ＝８，２２－２４月，雌雄各半）的骨骼肌再??生肌纤维面积在损伤后第５天和第１０天的ＨＥ染色片对比，？?（Ｂ）在损伤ｈ？第５天和第１０??天，幼龄鼠与老龄鼠的再生肌纤维横截面积对比。基准尺：ｌ〇〇Ｐｍ。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３．?Ｔｈｅ?ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ａｖｅｒａｇｅ?ｃｒｏｓｓ－ｓｅｃｔｉｏｎａｌ?ａｒｅａｓ?ｏｆ?ＴＡ?ｍｕｓｃｌｅ?ｆｉｂｅｒｓ?ｂｅｔｗｅｅｎ??ｙｏｕｎｇ?ａｎｄ?ｏｌｄ?ｍｉｃｅ?ｏｎ?ｂｏｔｈ?ｄａｙｓ?５?ａｎｄ?１０?ｐｏｓｔ－ｉｎｊｕｒｙ．??（Ａ）?Ｔｈｅ?ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ?ｏｆ?ＴＡ?ｍｕｓｃｌｅ?ｆｉｂｅｒｓ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｙｏｕｎｇ?（ｎ二８，８－１０?ｗｅｅｋｓ，?ｈａｌｆ?ｍａｌｅ?ａｎｄ??２８??


本文编号：3043048