番茄DNA甲基转移酶SlDNMT2基因RNAi表达载体的构建

发布时间：2021-02-21 23:40

　　DNA甲基化是发生在基因5′端5′-CpG-3′胞嘧啶上的DNA共价修饰作用,可调节基因转录,与植物的生长、发育、成熟、衰老有着密切关系。DNMT2是首先从拟南芥中发现的DNA甲基转移酶。该研究通过NCBI序列比对获得番茄中DNMT2的同源基因SlDNMT2的编码区序列;通过Primer5设计引物,PCR技术扩增获得SlDNMT2基因高度特异性序列（长度约500 bp）;利用一系列分子生物学试验研究方法最终成功构建SlDNMT2 RNAi表达载体,并命名为pBI121-35S∷siRNA1-siRNA2。该RNAi表达载体的构建为进一步探究SlDNMT2基因在植物生长发育过程中的功能奠定了一定的理论基础并提供了一条高效、迅速的载体构建途径。 

【文章来源】：安徽农业科学. 2020,48(03)

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

pBI12135S∷siRNA1-siRNA2酶切鉴定结果

利用限制性内切酶处理pSK-siRNA1-siRNA2阳性菌重组质粒和pBI121质粒,经Omega公司胶回收试剂盒回收siRNA1-siRNA2高度特异性片段,T4 DNA连接酶4 ℃过夜连接,转化DH5α大肠杆菌感受态,阳性菌鉴定,最终得到番茄植株SlDNMT2基因RNAi表达载体,并将该载体重新命名为pBI121-35S∷siRNA1-siRNA2。载体构建流程见图1。2 结果与分析

通过NCBI网站Blast获得番茄DNMT2基因的编码区,其CDS全长为1 146 bp,共编码381个氨基酸。利用Trizol试剂法提取番茄植物总RNA,质量检测结果如图2所示。将SlDNMT2基因氨基酸序列与拟南芥AtDNMT2进行同源性比对分析,结果显示番茄SlDNMT2和拟南芥AtDNMT2的同源性达62.05%(图3)。并选取SlDNMT2基因起始密码子(ATG)至终止密码子(TGA)的编码区,利用SGN-VIGS网站,在Solanum_lycopersicum_ITAG _v2.40资料库中筛选,最终获得大小约500 bp的SlDNMT2基因高度特异性序列,并命名为小干扰RNA序列(siRNA)。2.1.2 SlDNMT2基因特异性片段克隆。

【参考文献】：
期刊论文
[1]桔小实蝇钠离子通道基因和P450基因RNAi载体构建及转化[J]. 潘琦,岳建苏,王翠伦,于士将,周浩楠,杨娟生,侯栋元,成禄艳,冉春.  分子植物育种. 2019(02)
[2]甜菜内向整流K+通道BvAKT1基因RNAi载体的构建[J]. 伍国强,刘海龙,李胜胜,蔺丽媛,谢玲玲.  分子植物育种. 2019(01)



本文编号：3045093