人卵巢壁层颗粒细胞和卵丘细胞体外分离及原代培养的比较

发布时间：2021-02-22 02:32

　　目的:为建立合适卵巢功能研究的细胞模型,本研究比较了人卵巢壁层颗粒细胞（mural granulosa cells,MGCs）与卵丘细胞（cumulus cells,CCs）体外分离及原代培养的效果。方法:收集16例行辅助生殖技术治疗患者取卵日的卵泡液及其卵丘-卵母细胞复合物（223个）,采用密度梯度离心法分离MGCs,机械切割法+酶解法分离CCs。应用台盼蓝染色法比较CCs与MGCs的细胞总数和存活率,通过流式细胞术检测卵泡刺激素受体（follicle stimulating hormone receptor,FSHR）的表达来鉴定CCs与MGCs的细胞纯度,qPCR和Western blot方法检测微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3）、P62和Bax mRNA和蛋白的表达水平。结果:与MGCs相比,CCs的分离耗时少,细胞存活率高（P<0.05）,体外培养的细胞延展性好;流式细胞术显示分离后的CCs与MGCs的FSHR表达量分别为（92.23±2.66）%和（81.33±6.57）%,差异... 

【文章来源】：中国病理生理杂志. 2020,36(12)北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
材料和方法
    1 颗粒细胞来源
    2 主要试剂
    3 方法
        3.1 MGCs和CCs的分离
            3.1.1 MGCs的分离
            3.1.2 CCs的分离
        3.2 细胞计数与存活率检测
        3.3 细胞原代培养、细胞爬片与HE染色
        3.4 细胞纯度鉴定
        3.5 LC3、P62和Bax m RNA的q PCR检测
        3.6 LC3、P62和Bax蛋白的Western blot检测
    4 统计学处理
结果
    1 MGCs和CCs的分离耗时、细胞总数及存活率
    2 MGCs和CCs的细胞纯度
    3 MGCs和CCs体外原代培养的生长状态
    4 LC3、P62、Bax在MGCs与CCs中的m RNA表达水平
    5 LC3、P62和Bax蛋白在MGCs与CCs中的表达水平
讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞自噬与凋亡的交互作用[J]. 付晶晶,段君凯,李红.  生命的化学. 2014(05)
[2]两种人卵巢颗粒细胞分离提纯方法的比较研究[J]. 江欢,谢宝国,罗琛,李红,朱伟杰.  生殖与避孕. 2012(11)
[3]人卵丘细胞与卵母细胞发育及成熟的关系[J]. 黄鑫,郝翠芳.  生殖与避孕. 2012(08)



本文编号：3045304