表达TenascinC-FBG的重组狂犬病病毒的构建与鉴定
发布时间：2021-03-04 16:05
狂犬病是由狂犬病病毒引起的一种引起中枢神经损害的急性人兽共患病。每年全球接近59000人死于狂犬病,我国是狂犬病的高发地区之一。狂犬病一旦发病致死率几乎100%,目前尚无有效的治疗方法,而接种疫苗是目前预防狂犬病的最高效的方法。狂犬病病毒由5种结构蛋白以及单股负链RNA构成。糖蛋白位于细胞膜表面,是目前发现狂犬病病毒中唯一一种可以诱导机体产生中和抗体（Virus-neutralizing antibody,VNA）的蛋白。有研究表明,Tenascin C中的FBG结构域可以结合并激活Toll样受体4（Toll like receptor 4,TLR4）,基于本实验室之前的研究发现TLR4佐剂可以显著提高狂犬疫苗的免疫效果,我们推测Tenascin C也可用作狂犬疫苗的佐剂。为了探索Tenascin C的FBG结构域对于狂犬病病毒感染机体引起的免疫应答的影响,我们通过反向遗传操作构建了表达Tenascin C-FBG结构域的重组狂犬病病毒LBNSE-FBG-C,并对该重组病毒在体内外的基本特性进行了研究。首先在亲本狂犬病病毒LBNSE的G和L蛋白中间位置插入Tenascin C蛋白的FB...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RABV颗粒结构模式图(Davisetal.2015)
表达TenascinC-FBG的重组狂犬病病毒的构建与鉴定3弱毒毒株的G蛋白替换强毒G蛋白，会导致病毒的致病性减弱(Faberetal.2004)。L蛋白约有2127-2142个氨基酸，含量最少，主要发挥RNA依赖的RNA聚合酶（RNA-dependentRNApolymerase,RdRP）功能，参与病毒的转录复制(Holmesetal.2005)。图1-2RABV基因组结构模式图(Albertinietal.2011)Fig.1-2DiagramofRABVgenome(Albertinietal.2011)1.2.3狂犬病病毒的理化性质RABV的稳定性差，会被多种理化因子影响。RABV对高温，紫外线等物理因素敏感，病毒在56℃存活不到1h或被紫外线照射30min也可被有效灭活。部分消毒剂如75%酒精、甲醛、H2O2、高锰酸钾及脂溶剂等均会破坏病毒结构，使其失去感染机体的能力。环境的酸碱度对RABV也有影响，pH值在7.2-8.0时病毒较稳定，过高（>11）或过低（<5）也会造成病毒失活(潘铁骊等.2011)。RABV在低温环境中可以保存较长时间，4℃时病毒滴度可以保持10天左右，-80℃则可以稳定维持数年。1.3狂犬病的流行病学目前为止，狂犬病在除大洋洲和南极洲之外的地方都有存在，特别是在亚非地区危害较大，夏秋季节多发。所有的温血动物都有几率感染RABV，哺乳动物是主要储存宿主(Dietzscholdetal.2008)。欧美地区通过大规模疫苗接种使得狂犬病发病率持续下降，已基本得到控制，目前主要存在于狐狸、蝙蝠、鼬类等野生动物中。而亚非地区大多是发展中国家，因为人口密度大，经济较为落后，对于狂犬病的防控能力较差，是狂犬病的高发地区，而印度是狂犬病发病率最高的国家。流浪猫狗是狂犬病流行的一大因素，儿童与流浪猫狗接触几率大导致被抓伤或咬伤的风险增高。高达80%的狂犬病病例发生在农村，农村犬类多以放养为主，防控意识淡薄，管理监督制度不完善，疫苗接种覆盖率低都是?
华中农业大学2020届硕士研究生学位（毕业）论文4人数超过7000人（如图1-3）。21世纪以后，我国施行一系列政策防控狂犬病，疫情开始回落（如图1-4）。2015年WHO提出在2030年消除人类中的狂犬病，而疫苗接种是我国实现此目标的关键。图1-31950-2014年中国狂犬病报告病例数(中国疾病预防控制中心2016)Figure.1-3ReportontheincidenceofrabiesinChinaduring1950-2014图1-42015-2019年中国狂犬病报告Figure.1-4ReportontheincidenceofrabiesinChinaduring2015-20191.4狂犬病的发病机制RABV不能通过未受伤的皮肤感染，只能经伤口进入宿主体内，在伤口处的肌肉细胞中增殖，之后经运动神经逆轴突进入中枢神经系统（Centralnervoussystem,CNS）并大量增殖，从脊髓到脑的扩散速度加快。RABV的复制过程包括吸附胞吞、脱壳、基因组转录复制、组装、出芽。病毒表面囊膜上的G蛋白与宿主细胞744592502410276801644516422290010020030040050060070080090020152016201720182019狂犬病死亡数狂犬病发病数
【参考文献】：
期刊论文
[1]狂犬病疫苗佐剂的研究进展[J]. 朱业蕾,孙培录,于学杰,郑学星. 中国病原生物学杂志. 2017(03)
[2]狂犬病预防控制技术指南（2016版）[J]. Chinese Center for Disease Control and Prevention;. 中国病毒病杂志. 2016(03)
[3]铝佐剂特性及其研究进展[J]. 陈婷婷,陆伟根. 世界临床药物. 2015(02)
[4]CpG-ODN疫苗佐剂的研究进展[J]. 张庆勇,罗春华,朱武飞. 中国免疫学杂志. 2014(10)
[5]不同浓度配比的CpG ODN和Al（OH）3佐剂乙型肝炎疫苗的免疫原性[J]. 杨喆,丁敏,王丽丽,李伟,周长征,徐娅妮,李镭,马波. 中国生物制品学杂志. 2014(05)
[6]几种理化因子对狂犬病病毒分离株感染力影响的再检测[J]. 潘铁骊,张菲,张守峰,扈荣良. 中国生物制品学杂志. 2011(01)
[7]皮卡佐剂狂犬病疫苗的有效性[J]. 林海祥,俞永新. 中国生物制品学杂志. 2010(09)
本文编号：3063505
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RABV颗粒结构模式图(Davisetal.2015)
表达TenascinC-FBG的重组狂犬病病毒的构建与鉴定3弱毒毒株的G蛋白替换强毒G蛋白，会导致病毒的致病性减弱(Faberetal.2004)。L蛋白约有2127-2142个氨基酸，含量最少，主要发挥RNA依赖的RNA聚合酶（RNA-dependentRNApolymerase,RdRP）功能，参与病毒的转录复制(Holmesetal.2005)。图1-2RABV基因组结构模式图(Albertinietal.2011)Fig.1-2DiagramofRABVgenome(Albertinietal.2011)1.2.3狂犬病病毒的理化性质RABV的稳定性差，会被多种理化因子影响。RABV对高温，紫外线等物理因素敏感，病毒在56℃存活不到1h或被紫外线照射30min也可被有效灭活。部分消毒剂如75%酒精、甲醛、H2O2、高锰酸钾及脂溶剂等均会破坏病毒结构，使其失去感染机体的能力。环境的酸碱度对RABV也有影响，pH值在7.2-8.0时病毒较稳定，过高（>11）或过低（<5）也会造成病毒失活(潘铁骊等.2011)。RABV在低温环境中可以保存较长时间，4℃时病毒滴度可以保持10天左右，-80℃则可以稳定维持数年。1.3狂犬病的流行病学目前为止，狂犬病在除大洋洲和南极洲之外的地方都有存在，特别是在亚非地区危害较大，夏秋季节多发。所有的温血动物都有几率感染RABV，哺乳动物是主要储存宿主(Dietzscholdetal.2008)。欧美地区通过大规模疫苗接种使得狂犬病发病率持续下降，已基本得到控制，目前主要存在于狐狸、蝙蝠、鼬类等野生动物中。而亚非地区大多是发展中国家，因为人口密度大，经济较为落后，对于狂犬病的防控能力较差，是狂犬病的高发地区，而印度是狂犬病发病率最高的国家。流浪猫狗是狂犬病流行的一大因素，儿童与流浪猫狗接触几率大导致被抓伤或咬伤的风险增高。高达80%的狂犬病病例发生在农村，农村犬类多以放养为主，防控意识淡薄，管理监督制度不完善，疫苗接种覆盖率低都是?
华中农业大学2020届硕士研究生学位（毕业）论文4人数超过7000人（如图1-3）。21世纪以后，我国施行一系列政策防控狂犬病，疫情开始回落（如图1-4）。2015年WHO提出在2030年消除人类中的狂犬病，而疫苗接种是我国实现此目标的关键。图1-31950-2014年中国狂犬病报告病例数(中国疾病预防控制中心2016)Figure.1-3ReportontheincidenceofrabiesinChinaduring1950-2014图1-42015-2019年中国狂犬病报告Figure.1-4ReportontheincidenceofrabiesinChinaduring2015-20191.4狂犬病的发病机制RABV不能通过未受伤的皮肤感染，只能经伤口进入宿主体内，在伤口处的肌肉细胞中增殖，之后经运动神经逆轴突进入中枢神经系统（Centralnervoussystem,CNS）并大量增殖，从脊髓到脑的扩散速度加快。RABV的复制过程包括吸附胞吞、脱壳、基因组转录复制、组装、出芽。病毒表面囊膜上的G蛋白与宿主细胞744592502410276801644516422290010020030040050060070080090020152016201720182019狂犬病死亡数狂犬病发病数
【参考文献】：
期刊论文
[1]狂犬病疫苗佐剂的研究进展[J]. 朱业蕾,孙培录,于学杰,郑学星. 中国病原生物学杂志. 2017(03)
[2]狂犬病预防控制技术指南（2016版）[J]. Chinese Center for Disease Control and Prevention;. 中国病毒病杂志. 2016(03)
[3]铝佐剂特性及其研究进展[J]. 陈婷婷,陆伟根. 世界临床药物. 2015(02)
[4]CpG-ODN疫苗佐剂的研究进展[J]. 张庆勇,罗春华,朱武飞. 中国免疫学杂志. 2014(10)
[5]不同浓度配比的CpG ODN和Al（OH）3佐剂乙型肝炎疫苗的免疫原性[J]. 杨喆,丁敏,王丽丽,李伟,周长征,徐娅妮,李镭,马波. 中国生物制品学杂志. 2014(05)
[6]几种理化因子对狂犬病病毒分离株感染力影响的再检测[J]. 潘铁骊,张菲,张守峰,扈荣良. 中国生物制品学杂志. 2011(01)
[7]皮卡佐剂狂犬病疫苗的有效性[J]. 林海祥,俞永新. 中国生物制品学杂志. 2010(09)
本文编号：3063505
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3063505.html
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