双管基因枪介导的基因瞬时表达技术在拟南芥中的应用

发布时间：2021-03-08 21:38

　　基因瞬时表达是植物中研究目标基因功能的常用手段。在模式植物拟南芥（Arabidopsis thaliana）中,相比原生质体和农杆菌介导的基因异源表达技术,利用粒子轰击进行基因瞬时表达一直鲜有报道。其主要原因是拟南芥叶型相对较小、基因枪操作相对烦琐以及基因表达效率差异较大。该研究通过优化双管基因枪系统,在营养生长旺盛的拟南芥莲座叶中实现GFP和GUS基因高效表达。同时,通过GUS报告基因明确了坏死诱导因子BAX、Avh238和ATR13/Rpp13激发拟南芥细胞坏死的表型。但在本氏烟（Nicotianabenthamiana）中明显诱导细胞坏死的Avrblb1/RB基因对,在拟南芥中却丧失了诱导细胞坏死的活性。由于双管基因枪系统每次轰击时设置平行对照,可有效降低转化实验中的样本变异度,为拟南芥及其突变体研究中准确评价基因功能和高通量筛选目标基因提供新的技术参考。 

【文章来源】：植物学报. 2020,55(02)北大核心

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 植物材料
        1.1.2 质粒材料
    1.2 方法
        1.2.1 基因枪微粒子弹制备及双孔枪头的组装和轰击参数设置
        1.2.2 轰击转化
        1.2.3 报告基因的检测与观察
        1.2.4 双管基因枪转化结果统计分析
        1.2.5 本氏烟中农杆菌介导的基因瞬时表达
        1.2.6 转基因拟南芥的制备与检测
2 结果与讨论
    2.1 拟南芥中双管基因枪介导报告基因的瞬时表达
    2.2 双管基因枪可有效降低样本的变异度
    2.3 拟南芥叶片中应用双管基因枪介导瞬时表达测定效应基因功能
    2.4 讨论



本文编号：3071712