RNase R在大肠杆菌的表达和条件优化

发布时间：2021-03-13 08:48

　　近些年来,RNA研究领域特别是环状RNA算是目前生物医学研究领域的新兴热点方向之一,RNase R的活性直接影响其处理后环状RNA的质量,因此RNase R的生产和纯化值得深入的研究。核糖核酸外切酶R（RNase R）可降解几乎所有的线性RNA分子和Y结构RNA,但不易降解环形RNA（circRNA）、套索结构（lariat RNA）和3’突出末端少于7个核苷酸的双链RNA分子,因此可以构建内含子cDNA文库用于可变剪切研究。本研究从NCBI基因库找到了来源于大肠杆菌的核糖核酸酶R,从GDMCC购得含目的基因的菌株E.coli K12,提取基因组并以此为模板进行PCR,获得了目的基因。本研究的主要内容及结果如下:对目的基因rnr通过PCR进行扩增,并构建重组质粒pET22b-rnr;将重组质粒转入大肠杆菌BL21（DE3）中,筛选出重组大肠杆菌BL21（DE3）/pET22b-rnr。在LB培养基中对重组菌进行诱导以表达酶蛋白,通过SDS-PAGE分析其分子量大小。通过Ni柱亲和层析得到纯化的重组RNase R,并用酿酒酵母Total RNA作为底物进行酶活性测定,通过和RNase R... 

【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

RNaseⅡ、RNaseR和PNPase的结构

RNaseR的结构和示意模型

tmRNA-SmpB调节RNaseR活性示意图

【参考文献】：
期刊论文
[1]分子伴侣协助下抗肿瘤抗生素美达霉素生物合成中的糖基转移酶Med-ORF8的原核表达[J]. 万娟,邓会群,张碧乾,王蔚,蔡晓凤,李爱英.  微生物学通报. 2011(02)



本文编号：3079915