辣根过氧化物酶HRP C1A的异源表达、固定化及染料脱色研究

发布时间：2021-03-13 03:37

　　辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP）是一种来源于辣根的分泌型植物过氧化物酶,在医学诊断、检测分析、生物修复等领域有着广泛应用,市场需求量大。然而,目前该酶的工业生产方法主要是直接从辣根中提取制备,工艺复杂且成本较高。此外,分离提取的天然HRP为含40多种同工酶的混合物,无法获得大量单一组分的酶,一定程度上影响了酶制剂的质量,并且限制了对HRP结构与功能的基础研究。因此,研究利用合适的重组表达系统生产制备高催化活性的单一型HRP具有重要的理论意义和工业应用价值。辣根天然HRP中C1A同工酶的含量最为丰富且活性高,本研究遂以HRP C1A为研究对象,开展异源表达实验及基础应用研究。论文的主要研究成果如下:（1）实现了 HRP C1A在大肠杆菌中的异源重组表达,然而未能获得可溶性表达,重组酶基本全部存在于无活性的、不可溶包涵体中。对包涵体形式的HRP C1A进行了变复性研究,利用两步滴加稀释超速离心法,通过摸索复性条件,建立出优化的重折叠缓冲液体系（含0.4 mmol·L-1 GSSG,0.05 mmol·L-1 DTT,10%（v/v）甘油,1.7 mol... 

【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

辣根植物及其根部的示意图

辣根过氧化物酶同工酶C1A的三维结构图

辣根过氧化物酶同工酶C1A的血红素基团及其关键氨基酸残基Fig.1-3ThehemegroupofHRPC1Aanditskeyaminoacidresidues


本文编号：3079506