小鼠睾丸特异表达新基因LRRC34的分子克隆技术研究

发布时间：2021-03-19 13:47

　　目的:以小鼠睾丸组织c DNA文库为模板,利用RT-PCR技术成功地克隆出了一个在小鼠睾丸组织中特异性高表达的与生精细胞凋亡相关的新基因LRRC34。方法:经生物信息学分析,该基因定位于小鼠3号染色体的3A和3B之间,并且含有11个外显子,10个内含子。其c DNA全长序列为1 840 bp,开放阅读框为1 248 bp,编码一个含有415个氨基酸残基的蛋白质。结果:多组织RT-PCR结果表明,该基因仅在小鼠睾丸组织中特异性表达,因此推测其可能在睾丸发育和精子形成的过程中起重要作用。结论:本基因的克隆为后续LRRC34基因功能的研究奠定了良好的基础,为男性生殖方面相关疾病提供了一定的理论依据。 

【文章来源】：生物化工. 2020,6(01)

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

RT-PCR检测小鼠多组织cDNA第一链

通过改变退火温度进行最佳条件的探索，得到该基因的最佳退火温度为62℃，在最佳PCR克隆条件下对LRRC34基因进行PCR扩增（如图2示）。从图2中可看到，小鼠睾丸组织扩增出特异性产物，且基因片段长度在1 000～2 000 bp之间，这与LRRC34基因预期片段长度1 557 bp大体相符，说明该基因确实在小鼠睾丸组织中有表达，LRRC34基因被成功地扩增。将克隆产物连接到p MD18-T Vector Kit载体上，经测序，结果与序列完全一致，说明拼接序列是正确的。然后将含有LRRC34基因T载体的E.coli Top10菌液培养，抽质粒保存在超低温冰箱用于做后续实验。2.4 基因LRRC34在小鼠不同组织中的表达水平

以逆转录合成的小鼠多组织cDNA第一链为模板，用LRRC34的设计的引物作为引物，使用Taq DNA聚合酶进行PCR扩增LRRC34基因（如图3示）。从图3可看到，LRRC34基因仅在小鼠睾丸组织中有表达，而在小鼠其他组织中均不表达，从这一点说明LRRC34基因具有组织特异性，故而可以推断LRRC34基因是睾丸特异表达基因。3 讨论

【参考文献】：
期刊论文
[1]男性不育基础研究的现状及可能性途径[J]. 丁之德.  中国男科学杂志. 2010(03)
[2]小鼠生精细胞凋亡相关基因的分子克隆[J]. 姜宏,李麓芸,卢光琇.  生物化学与生物物理学报. 2001(04)
[3]小鼠雄性生殖细胞生后发育中的程序性死亡[J]. 王瑞安,小路武彦,郑平菊,张远强,中根一穗.  解剖学报. 1998(04)

硕士论文
[1]睾丸特异表达新基因Spata34和Mage-k1的克隆及蛋白表达和分离纯化[D]. 陈宏波.湖南理工学院 2017
[2]小鼠新基因Dnajc5b的克隆表达及Rcet1敲除后表型的检测研究[D]. 徐帅.湖南理工学院 2017



本文编号：3089676