长链非编码RNA（AC073934.6）慢病毒质粒构建及其对HEY和HeLa细胞系SND1表达的影响

发布时间：2021-03-19 20:51

　　目的:构建长链非编码RNA AC073934.6（lncRNA-AC）的慢病毒质粒,在HEY和HeLa细胞中稳定表达,并观察其对邻近基因SND1表达的影响。方法:提取基因组DNA,扩增出lncRNA-AC外显子1（F1R1）和外显子2（F2R2）,化学合成外显子3（F3R3）。利用重叠延伸PCR获得上述3个DNA片段的连接产物（F1R3）;通过同源重组的方法将F1R3和慢病毒载体pLVXIRES-Puro连接起来,构建pLVX-lncRNA-AC重组质粒。用慢病毒包装的方法获得过表达lncRNA-AC的慢病毒,随后感染HEY和HeLa细胞系,PCR检测lncRNA-AC的转录,通过实时荧光定量PCR和Western印迹检测SND1表达。结果:通过菌液PCR和测序验证了重组质粒pLVX-lncRNA-AC构建成功;利用慢病毒感染细胞后,通过PCR检测过表达lncRNA-AC的稳定株构建成功;在稳定株中通过实时荧光定量PCR检测SND1的mRNA水平,在HEY细胞系中,WT和过表达lncRNA-AC后SND1的mRNA相对表达量分别为1.00±0.14和1.24±0.19,两者比较,差异无... 

【文章来源】：天津医科大学学报. 2020,26(06)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

Lnc RNA-AC质粒构建示意图

Lnc RNA-AC和SND1基因的位置关系

Lnc RNA-AC的目的片段

【参考文献】：
期刊论文
[1]同义突变SND1慢病毒质粒的构建及回复表达[J]. 哈传博,赵然,雷静,高茹,杨洁,辛灵彪.  生物技术. 2018(04)
[2]双酶切和同源重组方法构建pMIR-reporter载体的比较[J]. 马凯,胡红霞,于婧,周丹,孙艳,马磊,沈波.  中国病原生物学杂志. 2015(06)
[3]一种载体构建的新方法:重组融合PCR法[J]. 邝翡婷,袁定阳,李莉,李新奇.  基因组学与应用生物学. 2012(06)



本文编号：3090209