鼠IFN-γ和IL-10细胞因子的表达及单克隆抗体的制备
发布时间：2021-03-20 02:59
细胞因子是一类小分子可溶性蛋白,对动物的固有免疫和适应性免疫起着十分重要的作用。IFN-γ和IL-10作为较为重要的细胞因子,吸引了众多研究者的关注。IFN-γ能直接调动体内的多种免疫原细胞的增殖与分化,参与所有的I型辅助T细胞（Th1细胞）的免疫反应;IL-10能抑制炎症反应并提高体内免疫系统对外来细菌和病毒的应答反应。本实验首先利用基因工程技术,表达纯化得到了鼠源的IFN-γ和IL-10蛋白。利用单克隆抗体技术,筛选出15株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株（分泌IFN-γ抗体的杂交瘤细胞株2株,分泌IL-10抗体的杂交瘤细胞株13株）。对分泌IFN-γ抗体的杂交瘤细胞株2D8进行亚型鉴定结果为Ig G2a型。将杂交瘤细胞2D8按照每只106个的剂量注入提前用弗氏不完全佐剂处理的小鼠腹腔,通过腹水采集和纯化获得了IFN-γ抗体。本工作中表达纯化得到的IFN-γ和IL-10蛋白,可以为其他研究者进一步研究这两种鼠源细胞因子结构与功能及其相关疾病提供重要的物质基础,通过单克隆抗体技术得到能稳定分泌IFN-γ和IL-10抗体的杂交瘤细胞,可以为后续建立双抗夹心ELISA方法...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
IFN-的结构（王海春2012）
IL-10的结构（Walteretal1995）
华中农业大学2020届硕士研究生学位（毕业）论文12图1.3单克隆抗体的制备流程（张帝等2014）Fig1.3Preparationprocessofmonoclonalantibody1.6本研究的目的及意义细胞因子作为各种免疫细胞和一部分非免疫细胞所分泌的可溶性小分子蛋白质，对机体具有极其广泛的生物学效应，包括调节机体的免疫应答，细胞间的信号传递，调控免疫细胞的分裂与分化等。IFN-和IL-10是动物体内较为重要的两种细胞因子，IFN-作为最重要的炎症细胞因子，直接或间接参与着机体中所有的免疫反应；IL-10作为生物活性最强的炎症抑制因子，能直接参与机体内Th1和Th2细胞间免疫调节。因此，这两种细胞因子的表达水平可以反映动物体的健康状态。基于此，本研究首先利用大肠杆菌表达系统，外源表达获得鼠IFN-和IL-10两种重组细胞因子。利用这两种重组细胞因子免疫小鼠，通过细胞融合以及亚克隆技术得到了能稳定分泌IFN-和IL-10的杂交瘤细胞。总之，本实验得到了鼠的IFN-、IL-10细胞因子蛋白以及相应的抗体，为进一步研究其结构和功能奠定了基矗筛选得到的杂交瘤细胞，也是后续建立双抗夹心ELISA检测方法的关键。
【参考文献】：
期刊论文
[1]IFN-γ研究进展与临床应用[J]. 李靖,董文学,杨美盼,马利锋,康龙丽. 卫生职业教育. 2019(23)
[2]结核性脑膜炎外周血和脑脊液中干扰素-γ、腺苷脱氨酶及T淋巴细胞亚群的变化及意义[J]. 贺莹,周慧敏. 解放军医药杂志. 2019(10)
[3]四君子汤对脾虚小鼠感染念珠菌后小肠组织中IFN-γ表达影响[J]. 吴艳梅,马贤德,韩晓伟,谭健,关洪全. 辽宁中医药大学学报. 2019(10)
[4]藏药二十五味儿茶凝胶对慢性湿疹大鼠血清中IL-4及IFN-γ表达的影响[J]. 张博,王思农,柳文红,朱鹏,郑婷. 中华中医药杂志. 2019(09)
[5]不同基因型沙眼衣原体小鼠生殖道感染中CPAF、IFN-γ和IL-10的表达[J]. 王柳苑,赵培祯,薛耀华,杨立刚,郑和平,杨斌. 皮肤性病诊疗学杂志. 2019(04)
[6]肿瘤相关中性粒细胞促进肿瘤过程中细胞因子影响作用的研究进展[J]. 李程豪,王厚明,骆亚莉,刘永琦. 生命科学. 2019(01)
[7]γ-干扰素对哮喘血清炎症因子及MUC5ac表达的影响分析[J]. 贺智英,汪丽丽,郝琴. 基因组学与应用生物学. 2019(03)
[8]Ⅲ型干扰素的研究进展[J]. 郭富城,常秋燕,李林杰,马鹏,李凌浩,王悦萦,马晓霞,马忠仁,陈士恩. 黑龙江畜牧兽医. 2018(17)
[9]趋化因子及其受体在肿瘤发生发展中作用的研究进展[J]. 董智琦,文国容,庹必光. 安徽医药. 2018(06)
[10]芽孢杆菌表达系统的特点及研究进展[J]. 苗苗,黄昆仑,梁志宏. 食品工业科技. 2017(18)
硕士论文
[1]山羊IFN-γ杂交瘤细胞的制备与鉴定[D]. 刘鹤媛.西北农林科技大学 2016
[2]重组牛γ-干扰素的表达、纯化、鉴定及其抗体制备[D]. 王海春.中国农业科学院 2012
[3]水牛IFN-γ克隆表达及其单克隆抗体的制备与应用[D]. 邹新峰.华中农业大学 2011
[4]稳定分泌抗牛γ-干扰素杂交瘤细胞株的建立与鉴定[D]. 曹黎黎.东北农业大学 2011
本文编号：3090443
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
IFN-的结构（王海春2012）
IL-10的结构（Walteretal1995）
华中农业大学2020届硕士研究生学位（毕业）论文12图1.3单克隆抗体的制备流程（张帝等2014）Fig1.3Preparationprocessofmonoclonalantibody1.6本研究的目的及意义细胞因子作为各种免疫细胞和一部分非免疫细胞所分泌的可溶性小分子蛋白质，对机体具有极其广泛的生物学效应，包括调节机体的免疫应答，细胞间的信号传递，调控免疫细胞的分裂与分化等。IFN-和IL-10是动物体内较为重要的两种细胞因子，IFN-作为最重要的炎症细胞因子，直接或间接参与着机体中所有的免疫反应；IL-10作为生物活性最强的炎症抑制因子，能直接参与机体内Th1和Th2细胞间免疫调节。因此，这两种细胞因子的表达水平可以反映动物体的健康状态。基于此，本研究首先利用大肠杆菌表达系统，外源表达获得鼠IFN-和IL-10两种重组细胞因子。利用这两种重组细胞因子免疫小鼠，通过细胞融合以及亚克隆技术得到了能稳定分泌IFN-和IL-10的杂交瘤细胞。总之，本实验得到了鼠的IFN-、IL-10细胞因子蛋白以及相应的抗体，为进一步研究其结构和功能奠定了基矗筛选得到的杂交瘤细胞，也是后续建立双抗夹心ELISA检测方法的关键。
【参考文献】：
期刊论文
[1]IFN-γ研究进展与临床应用[J]. 李靖,董文学,杨美盼,马利锋,康龙丽. 卫生职业教育. 2019(23)
[2]结核性脑膜炎外周血和脑脊液中干扰素-γ、腺苷脱氨酶及T淋巴细胞亚群的变化及意义[J]. 贺莹,周慧敏. 解放军医药杂志. 2019(10)
[3]四君子汤对脾虚小鼠感染念珠菌后小肠组织中IFN-γ表达影响[J]. 吴艳梅,马贤德,韩晓伟,谭健,关洪全. 辽宁中医药大学学报. 2019(10)
[4]藏药二十五味儿茶凝胶对慢性湿疹大鼠血清中IL-4及IFN-γ表达的影响[J]. 张博,王思农,柳文红,朱鹏,郑婷. 中华中医药杂志. 2019(09)
[5]不同基因型沙眼衣原体小鼠生殖道感染中CPAF、IFN-γ和IL-10的表达[J]. 王柳苑,赵培祯,薛耀华,杨立刚,郑和平,杨斌. 皮肤性病诊疗学杂志. 2019(04)
[6]肿瘤相关中性粒细胞促进肿瘤过程中细胞因子影响作用的研究进展[J]. 李程豪,王厚明,骆亚莉,刘永琦. 生命科学. 2019(01)
[7]γ-干扰素对哮喘血清炎症因子及MUC5ac表达的影响分析[J]. 贺智英,汪丽丽,郝琴. 基因组学与应用生物学. 2019(03)
[8]Ⅲ型干扰素的研究进展[J]. 郭富城,常秋燕,李林杰,马鹏,李凌浩,王悦萦,马晓霞,马忠仁,陈士恩. 黑龙江畜牧兽医. 2018(17)
[9]趋化因子及其受体在肿瘤发生发展中作用的研究进展[J]. 董智琦,文国容,庹必光. 安徽医药. 2018(06)
[10]芽孢杆菌表达系统的特点及研究进展[J]. 苗苗,黄昆仑,梁志宏. 食品工业科技. 2017(18)
硕士论文
[1]山羊IFN-γ杂交瘤细胞的制备与鉴定[D]. 刘鹤媛.西北农林科技大学 2016
[2]重组牛γ-干扰素的表达、纯化、鉴定及其抗体制备[D]. 王海春.中国农业科学院 2012
[3]水牛IFN-γ克隆表达及其单克隆抗体的制备与应用[D]. 邹新峰.华中农业大学 2011
[4]稳定分泌抗牛γ-干扰素杂交瘤细胞株的建立与鉴定[D]. 曹黎黎.东北农业大学 2011
本文编号：3090443
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