肾上腺皮质束状带特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的构建

发布时间：2021-03-24 11:28

　　肾上腺是人体重要的内分泌器官。由于缺乏肾上腺皮质束状带特异性表达Cre酶的工具鼠,目前对肾上腺皮质束状带细胞中特异表达基因的功能缺乏深入的解析。CYP11B1基因编码类固醇11β-羟化酶,该酶是糖皮质激素合成的关键酶,在肾上腺皮质束状带中特异性表达。本研究旨在利用CYP11B1基因在束状带特异性表达的特点,构建在肾上腺皮质束状带中特异性表达Cre重组酶的转基因动物。采用CRISPR/Cas9技术在CYP11B1基因终止密码子位点定点敲入2A-GfpCre表达框,获得CYP11B1-2A-GfpCre同源重组载体,进而构建CYP11B1Cre小鼠,并通过mTmG和LacZ染色确定Cre酶主要表达在小鼠肾上腺皮质束状带。在此基础上,本研究还用该工具鼠与胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionineγ-lyase, CTH）条件性敲除鼠交配,获得了肾上腺皮质束状带CTH特异性敲除的小鼠,并证实了该动物肾上腺皮质束状带中CTH表达缺失。以上结果充分说明肾上腺皮质束状带特异性表达Cre重组酶小鼠构建成功。该工具鼠的成功构建,为深入研究肾上腺皮质束状带相关功能提供了有力工具。 

【文章来源】：生理学报. 2020,72(02)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

CYP11B1蛋白在小鼠肾上腺组织的分布

Cre工具小鼠主要用于和不同基因的flox小鼠交配，以获得某种基因在特定组织中敲除或敲低的动物[30–33]。本研究组以往的研究表明，小鼠肾上腺皮质表达CTH基因及其蛋白[5]。本研究将CTHf/f小鼠与CYP11B1Cre鼠交配，通过基因鉴定获得CTHf/f/CYP11B1Cre和CTH/f/CYP11B1Cre小鼠，并用Western blot方法检测了这两种小鼠心、肝、脾、肺、肾和肾上腺组织中CTH表达，结果如图5所示，在CTHf/f/CYP11B1Cre小鼠肾上腺组织中未检测到CTH蛋白，而心、肝、脾、肺、肾组织中仍然有CTH表达。图4.CYP11B1Cre小鼠与LacZ工具鼠交配获得的Cre及LacZ双阳性小鼠各组织β-gal着色

图3.CYP11B1Cre小鼠与mTmG工具鼠交配获得的Cre及mTmG双阳性小鼠各组织中mTmG的表达图5.胱硫醚-γ-裂解酶(CTH)在不同基因型小鼠多种组织中的蛋白表达水平


本文编号：3097642