油菜和拟南芥AAD5基因在调控种子脂肪酸积累方面的功能分析
发布时间：2021-03-31 12:52
ACYL-ACYL CARRYIER PROTEIN DESATURASEs（AADs）在植物细胞中特异地催化硬脂酸（C18:0）转化为油酸（C18:1）。前人的研究表明,AAD在拟南芥中共有7个成员,它们分别为:AtSSI2、AtAAD1、AtAAD2、AtAAD3、AtAAD4、AtAAD5和AtAAD6。除AtAAD5外,拟南芥其他AAD家族成员在脂肪酸积累及抗逆境胁迫等方面的功能均已有较为深入的研究。此外,油菜中AAD5基因的功能仍不清楚。鉴于此,本文首先研究了AtAAD5在拟南芥中的时空表达模式以及对种子脂肪酸积累的影响;利用生物信息学方法分析比较了AAD5在十字花科植物及主要油料作物中的亲缘关系;从甘蓝型油菜自交系品种L111中克隆了与AtAAD5序列亲缘关系最相近的BnAAD5-1基因的全长编码区,构建了其过表达载体并成功转入对应的拟南芥突变体aad5-2中,获得aad5-2 35S:BnAAD5-1纯合转基因株系。在此基础上,我们分析比较了AtAAD5及BnAAD5-1在种子脂肪酸合成积累方面的功能。本研究获得的主要研究结果如下:（1）构建了pAtAAD5:GUS载体并...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
拟南芥种子发育过程示意图（引自Baudetal.2008）
图 2.1 本试验构建的两种质粒载体示意图Figure 2.1 Schematic diagram of two plasmid constructed in this experiment如图 2.1 所示为本研究中构建的两个质粒载体的结构示意图。图 2.1 A 为pAtAAD5:GUS 载体示意图，利用限制性内切酶 Hind III 和 Xma I 将 AtAAD5 基因启动子连在质粒中 GUS 基因之前，可以在 AtAAD5 基因本身特定的组织时期表达 GUS 基因，方便我们检测；图 2.1 B 为过表达载体示意图，利用 Xma I 和 Spe I 内切酶将 BnAAD5-1基因连入过表达质粒载体中，转化入植物中后可以在拟南芥各个组织时期过量表达。两种双元质粒载体均带有卡那抗性和 Basta 抗性基因以便于筛选。2.5.3.1 PCR 扩增AtAAD5 基因启动子的 PCR 扩增：用前文表 1 中给出的引物克隆 AtAAD5 启动子和BnAAD5-1 基因 CDS，分别以的拟南芥 Col-0 野生型 Genomic DNA 和甘蓝型油菜 L111自交系 cDNA 作为模板克隆目标序列基因。本试验使用 Takara 公司 PrimerStar Taq 高保真酶进行 PCR 扩增。
第二章 材料与方法第三章 结果与分析 AtAAD5 基因的表达模式分析前人研究表明 AtAAD5 基因在拟南芥各个组织包括根、茎、叶片、花、角果中广（Kachroo et al. 2007），为了进一步验证该基因在野生型拟南芥中的时空表达模构建了 pAtAAD5:GUS 载体并成功转化入拟南芥野生型 Col-0 中，共获得 19 个AD5:GUS 转基因株系。采集转基因株系中发芽的幼苗、莲座叶、茎生叶、花、荚果以及发育成熟各个时期的种子等组织材料，利用 X-Gluc 溶液进行着色后表且不同株系间表型基本相同，故选取其中最典型的一个株系作为展示分析，如图示。A B C D
【参考文献】：
期刊论文
[1]多不饱和脂肪酸对动物脂类代谢的调节作用与机制[J]. 王雪,闫素梅. 动物营养学报. 2019(06)
[2]婴幼儿配方食品中添加长链多不饱和脂肪酸的健康效益:系统综述[J]. 房爱萍,陈偲,韩军花,朱惠莲. 营养学报. 2018(06)
[3]油菜育种行业创新动态与发展趋势[J]. 范成明,田建华,胡赞民,王珏,吕慧颖,葛毅强,魏珣,邓向东,张蕾颖,杨维才. 植物遗传资源学报. 2018(03)
[4]我国油菜产业现状、发展困境及建议[J]. 刘成,黄杰,冷博峰,冯中朝,李俊鹏. 中国农业大学学报. 2017(12)
[5]我国白菜型冬油菜与甘蓝型冬油菜抗寒性研究进展[J]. 罗斌,赵卫国,李保军,赵亚军,朱彦涛,王灏. 陕西农业科学. 2017(09)
[6]双低菜籽油的保健作用与高含油量优质油菜育种及高效益思考[J]. 李殿荣,陈文杰,于修烛,王灏,任军荣,张耀文. 中国油料作物学报. 2016(06)
[7]劳动力转移损害了油菜生产吗?——基于要素产出弹性和替代弹性的实证[J]. 李谷成,梁玲,尹朝静,冯中朝. 华中农业大学学报(社会科学版). 2015(01)
[8]近十三年我国冬油菜新品种单产与含油量的变化分析[J]. 李殿荣,郑磊,李少钦. 种子. 2014(02)
[9]中国植物油产业发展现状、问题及对策研究[J]. 周振亚,李建平,张晴,罗其友. 中国农学通报. 2011(32)
[10]油脂中脂肪酸成分与人体健康[J]. 王华志,王道波,李秋霖,王凤玲,熊素敏. 粮油加工. 2010(06)
博士论文
[1]甘蓝型油菜及其亲本物种TTG1和TT18基因家族的克隆与比较基因组学研究[D]. 吕俊.西南大学 2009
本文编号：3111473
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
拟南芥种子发育过程示意图（引自Baudetal.2008）
图 2.1 本试验构建的两种质粒载体示意图Figure 2.1 Schematic diagram of two plasmid constructed in this experiment如图 2.1 所示为本研究中构建的两个质粒载体的结构示意图。图 2.1 A 为pAtAAD5:GUS 载体示意图，利用限制性内切酶 Hind III 和 Xma I 将 AtAAD5 基因启动子连在质粒中 GUS 基因之前，可以在 AtAAD5 基因本身特定的组织时期表达 GUS 基因，方便我们检测；图 2.1 B 为过表达载体示意图，利用 Xma I 和 Spe I 内切酶将 BnAAD5-1基因连入过表达质粒载体中，转化入植物中后可以在拟南芥各个组织时期过量表达。两种双元质粒载体均带有卡那抗性和 Basta 抗性基因以便于筛选。2.5.3.1 PCR 扩增AtAAD5 基因启动子的 PCR 扩增：用前文表 1 中给出的引物克隆 AtAAD5 启动子和BnAAD5-1 基因 CDS，分别以的拟南芥 Col-0 野生型 Genomic DNA 和甘蓝型油菜 L111自交系 cDNA 作为模板克隆目标序列基因。本试验使用 Takara 公司 PrimerStar Taq 高保真酶进行 PCR 扩增。
第二章 材料与方法第三章 结果与分析 AtAAD5 基因的表达模式分析前人研究表明 AtAAD5 基因在拟南芥各个组织包括根、茎、叶片、花、角果中广（Kachroo et al. 2007），为了进一步验证该基因在野生型拟南芥中的时空表达模构建了 pAtAAD5:GUS 载体并成功转化入拟南芥野生型 Col-0 中，共获得 19 个AD5:GUS 转基因株系。采集转基因株系中发芽的幼苗、莲座叶、茎生叶、花、荚果以及发育成熟各个时期的种子等组织材料，利用 X-Gluc 溶液进行着色后表且不同株系间表型基本相同，故选取其中最典型的一个株系作为展示分析，如图示。A B C D
【参考文献】：
期刊论文
[1]多不饱和脂肪酸对动物脂类代谢的调节作用与机制[J]. 王雪,闫素梅. 动物营养学报. 2019(06)
[2]婴幼儿配方食品中添加长链多不饱和脂肪酸的健康效益:系统综述[J]. 房爱萍,陈偲,韩军花,朱惠莲. 营养学报. 2018(06)
[3]油菜育种行业创新动态与发展趋势[J]. 范成明,田建华,胡赞民,王珏,吕慧颖,葛毅强,魏珣,邓向东,张蕾颖,杨维才. 植物遗传资源学报. 2018(03)
[4]我国油菜产业现状、发展困境及建议[J]. 刘成,黄杰,冷博峰,冯中朝,李俊鹏. 中国农业大学学报. 2017(12)
[5]我国白菜型冬油菜与甘蓝型冬油菜抗寒性研究进展[J]. 罗斌,赵卫国,李保军,赵亚军,朱彦涛,王灏. 陕西农业科学. 2017(09)
[6]双低菜籽油的保健作用与高含油量优质油菜育种及高效益思考[J]. 李殿荣,陈文杰,于修烛,王灏,任军荣,张耀文. 中国油料作物学报. 2016(06)
[7]劳动力转移损害了油菜生产吗?——基于要素产出弹性和替代弹性的实证[J]. 李谷成,梁玲,尹朝静,冯中朝. 华中农业大学学报(社会科学版). 2015(01)
[8]近十三年我国冬油菜新品种单产与含油量的变化分析[J]. 李殿荣,郑磊,李少钦. 种子. 2014(02)
[9]中国植物油产业发展现状、问题及对策研究[J]. 周振亚,李建平,张晴,罗其友. 中国农学通报. 2011(32)
[10]油脂中脂肪酸成分与人体健康[J]. 王华志,王道波,李秋霖,王凤玲,熊素敏. 粮油加工. 2010(06)
博士论文
[1]甘蓝型油菜及其亲本物种TTG1和TT18基因家族的克隆与比较基因组学研究[D]. 吕俊.西南大学 2009
本文编号：3111473
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3111473.html
教材专著
