UVB致HaCaT细胞损伤中SIRT3相关研究
发布时间：2021-04-01 12:32
背景目的:中波紫外线（UVB）的过度暴露会损伤各种生物大分子,诱导炎症反应,抑制增殖和促进细胞衰老与死亡。UVB是太阳光中紫外线致癌的主要因素。皮肤是人体最大的器官,也是最易遭受UVB损伤的器官。UVB的穿透力弱,仅能到达表皮层,因此相关研究主要采用占表皮细胞主体的角质形成细胞。UVB致角质形成细胞的各种损伤多与活性氧（ROS）蓄积导致的氧化应激密切相关。细胞中90%的ROS来自于线粒体,同时线粒体也是ROS清除的主要场所。线粒体中的多种酶参与ROS的清除,包含超氧化物歧化酶2（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px）和过氧化氢酶（catalase）等。正常生理条件下,ROS的水平会维持在极低有利无害的水平。角质形成细胞被UVB照射会引起细胞内ROS水平显著增加,这与线粒体中抗氧化酶活性的下降密切相关。乙酰化修饰是影响线粒体中抗氧化酶活性的主要方式,定位在线粒体的去乙酰化酶SIRT3在角质形成细胞中的研究很少。本研究选用HaCaT这种UVB照射对表皮角质细胞的影响相关研究的成熟的体外模型。采用q...
【文章来源】：大连医科大学辽宁省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
UVB对SIRT3表达的影响A.UVB
大连医科大学硕士学位论文222.UVB照射后HaCaT细胞中ROS水平升高和SOD2表达降低UVB照射后对HaCaT细胞多种生物学过程的影响都与氧化应激有关。目前，氧化应激的检测指标主要有ROS水平、抗氧化酶表达和活性、抗氧化物如GSH、脂质过氧化产物等。本研究中首先采用DHE法通过荧光显微镜（图2A）和荧光酶标仪（图2B）测定了UVB照射后细胞中ROS的水平。发现，HaCaT细胞ROS水平均被30mJ/cm2和120mJ/cm2剂量的UVB照射后升高，而且120mJ/cm2剂量升高更显著。接下来检测了抗氧化酶SOD2蛋白的表达，发现这两个照射剂量均下调了SOD2的水平，120mJ/cm2UVB被下调得更为显著（图2C）。ABC图2.UVB照射对HaCaT细胞ROS的影响A.荧光显微镜观察（200X）B.荧光酶标仪测定C.WesternBlot结果显示UVB照射后SOD2蛋白表达(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)3.UVB照射抑制HaCaT细胞迁移能力上皮间质转化（EMT）是与迁移密切相关的一种表型改变，在胚胎发育、器官的细胞更新和再生，以及多功能干细胞的分化等过程均发挥重要的生理作用。通过EMT，上皮细胞失去细胞极性和与基底膜的连接，获得较高的迁移与侵袭能力。我们采用划痕实验检测了UVB照射对HaCaT细胞迁移能力的影响。30mJ/cm2UVB照射未把细胞迁移明显减慢，HaCaT细胞被120mJ/cm2剂量UVB照射后迁移被显
大连医科大学硕士学位论文23A处CD著抑制（图3A）。Westernblot结果显示被120mJ/cm2剂量UVB照射后迁移相关的Twist蛋白表达下降，30mJ/cm2剂量UVB照射后没有改变Twist的表达（图3B）。照射后细胞增殖未被30mJ/cm2UVB明显抑制，120mJ/cm2剂量UVB照射后HaCaT细胞增殖被显著抑制（图3C-D）。B图3.UVB对HaCaT细胞迁移能力的影响.A.倒置显微镜下观察UVB照射前后HaCaT细胞划痕实验结果（100X）B.UVB照射后Twist蛋白表达C.倒置显微镜观察不同剂量UVB照射对HaCaT细胞生长的影响（100X）D.CCK-8法检测UVB对HaCaT细胞活力的影响(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)4.SIRT3过表达减弱了UVB损伤作用为探讨线粒体SIRT3对UVB致氧化应激的影响，我们检测了SIRT3过表达对高剂量UVB照射损伤作用的影响。SIRT3过表达（图4A）能下调120mJ/cm2UVB照射引起的ROS水平增高（图4B，4C）和SOD2蛋白水平的下降（图4D）。同时在一定程度上逆转了UVB对细胞迁移和增殖能力的下调（图4E-G）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Mutual interaction between oxidative stress and endoplasmic reticulum stress in the pathogenesis of diseases specifically focusing on non-alcoholic fatty liver disease[J]. Junichi Fujii,Takujiro Homma,Sho Kobayashi,Han Geuk Seo. World Journal of Biological Chemistry. 2018(01)
本文编号：3113340
【文章来源】：大连医科大学辽宁省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
UVB对SIRT3表达的影响A.UVB
大连医科大学硕士学位论文222.UVB照射后HaCaT细胞中ROS水平升高和SOD2表达降低UVB照射后对HaCaT细胞多种生物学过程的影响都与氧化应激有关。目前，氧化应激的检测指标主要有ROS水平、抗氧化酶表达和活性、抗氧化物如GSH、脂质过氧化产物等。本研究中首先采用DHE法通过荧光显微镜（图2A）和荧光酶标仪（图2B）测定了UVB照射后细胞中ROS的水平。发现，HaCaT细胞ROS水平均被30mJ/cm2和120mJ/cm2剂量的UVB照射后升高，而且120mJ/cm2剂量升高更显著。接下来检测了抗氧化酶SOD2蛋白的表达，发现这两个照射剂量均下调了SOD2的水平，120mJ/cm2UVB被下调得更为显著（图2C）。ABC图2.UVB照射对HaCaT细胞ROS的影响A.荧光显微镜观察（200X）B.荧光酶标仪测定C.WesternBlot结果显示UVB照射后SOD2蛋白表达(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)3.UVB照射抑制HaCaT细胞迁移能力上皮间质转化（EMT）是与迁移密切相关的一种表型改变，在胚胎发育、器官的细胞更新和再生，以及多功能干细胞的分化等过程均发挥重要的生理作用。通过EMT，上皮细胞失去细胞极性和与基底膜的连接，获得较高的迁移与侵袭能力。我们采用划痕实验检测了UVB照射对HaCaT细胞迁移能力的影响。30mJ/cm2UVB照射未把细胞迁移明显减慢，HaCaT细胞被120mJ/cm2剂量UVB照射后迁移被显
大连医科大学硕士学位论文23A处CD著抑制（图3A）。Westernblot结果显示被120mJ/cm2剂量UVB照射后迁移相关的Twist蛋白表达下降，30mJ/cm2剂量UVB照射后没有改变Twist的表达（图3B）。照射后细胞增殖未被30mJ/cm2UVB明显抑制，120mJ/cm2剂量UVB照射后HaCaT细胞增殖被显著抑制（图3C-D）。B图3.UVB对HaCaT细胞迁移能力的影响.A.倒置显微镜下观察UVB照射前后HaCaT细胞划痕实验结果（100X）B.UVB照射后Twist蛋白表达C.倒置显微镜观察不同剂量UVB照射对HaCaT细胞生长的影响（100X）D.CCK-8法检测UVB对HaCaT细胞活力的影响(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)4.SIRT3过表达减弱了UVB损伤作用为探讨线粒体SIRT3对UVB致氧化应激的影响，我们检测了SIRT3过表达对高剂量UVB照射损伤作用的影响。SIRT3过表达（图4A）能下调120mJ/cm2UVB照射引起的ROS水平增高（图4B，4C）和SOD2蛋白水平的下降（图4D）。同时在一定程度上逆转了UVB对细胞迁移和增殖能力的下调（图4E-G）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Mutual interaction between oxidative stress and endoplasmic reticulum stress in the pathogenesis of diseases specifically focusing on non-alcoholic fatty liver disease[J]. Junichi Fujii,Takujiro Homma,Sho Kobayashi,Han Geuk Seo. World Journal of Biological Chemistry. 2018(01)
本文编号：3113340
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3113340.html
教材专著
