唾液乳杆菌膜外蛋白间接促进金葡菌黏附机制及效应蛋白的表达

发布时间：2021-04-02 08:12

　　目前,食源性致病菌依然是危害公共卫生的一大因素,已经引起社会各界的广泛重视,金葡菌就是最为常见的食源性致病菌之一。黏附是宿主中致病菌定植和感染的第一步,被认为是重要的威胁因素之一。通常认为益生菌可以通过空间位阻抑制致病菌的黏附并减少其在体内的积累。然而,有研究表明,一些乳杆菌能促进致病菌黏附,有人认为这可能是因为益生菌一方面与肠道黏附,另一方面与致病菌黏附,但具体机制尚不清楚。因此本研究采用前期筛选的益生性唾液乳杆菌与金葡菌为研究对象,试图从膜外蛋白角度研究益生菌是否通过膜外蛋白促进金葡菌黏附。首先我们研究了唾液乳杆菌与金葡菌的直接黏附效果。将菌株分别离心稀释,唾液乳杆菌与金葡菌共同作用4小时后,通过显微镜观察了唾液乳杆菌与金葡菌是否直接黏附,进一步提取唾液乳杆菌膜外蛋白,通过电镜和蛋白包被法研究其与金葡菌黏附效果。培养Caco-2细胞,通过结晶紫染色和涂板计数两种方法验证膜外蛋白是否间接促进金葡菌对细胞的黏附作用。为了分析基于唾液乳杆菌膜外蛋白促进金葡菌黏附的分子机制,通过前期质谱结果选取评分最高的细菌底物结合蛋白ABC transporter substrate-binding p... 

【文章来源】：吉林农业大学吉林省

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

提取质粒流程图

pET-28a质粒图谱

2.2.3.3 ABCtsb 与 pET-28a 载体重组质粒的构建ABCtsb 与 pET-28a 载体重组质粒的构建如图 3 所示。将 ABCtsb 的 PCR 物与 pET-28a 载体分别进行双酶切。反应体系如表 6 所示， 50 μL：25 μL PC产物或 pET-28a 载体，5 μL Buffer，BamH Ⅰ1μL，XhoⅠ1μL，ddH2O 补至 50 μ37 ℃ 水浴锅中孵育 3 小时。结束后按照 2.2.3.2 方法进行琼脂糖凝胶电泳，再按照 2.2.3.3 方法进行胶回收。将胶回收产物进行连接，连接体系为 0.5 μLT4 连接酶，1 μL Buffer，PCR 物与 pET-28a 载体按照不同比例加入，最后 ddH2O 补至 10 μL，16℃ 水浴锅连接过夜。


本文编号：3114930