谷氨酸棒杆菌乳酰谷胱甘肽裂合酶和三磷酸甘油醛脱氢酶基因克

发布时间：2021-04-06 03:26

　　乳酰谷胱甘肽裂合酶（Lac）是降解生物体内丙酮醛的重要酶之一。食品级微生物谷氨酸棒杆菌ATCC13032基因组上的NCgl0106预测为乳酰谷胱甘肽裂合酶基因,但尚缺乏实验验证。本试验首先通过PCR技术扩增出预测的谷氨酸棒状杆菌ATCC13032乳酰谷胱甘肽裂合酶基因lac,并将之与表达载体pET-28a连接,转化BL21（DE3）感受态细胞,成功获得工程菌E.coli BL21（DE3）/pET-28a-lac。然后,使用IPTG诱导E.coli BL21（DE3）/pET-28a-lac表达重组蛋白乳酰谷胱甘肽裂合酶。SDS-PAGE试验结果表明:重组乳酰谷胱甘肽裂合酶蛋白在大肠杆菌进行了可溶性表达,其分子量约为14kDa。最后,对重组乳酰谷胱甘肽裂合酶蛋白进行了分离纯化、活性检测及酶学特性分析。应用His-tag纯化获得的重组蛋白溶液浓度为604.9μg/mL;活性检测显示重组乳酰谷胱甘肽裂合酶蛋白能催化丙酮醛和谷胱甘肽生成S-D-乳酰谷胱甘肽,表明谷氨酸棒杆菌NCgl0106是乳酰谷胱甘肽裂合酶基因;酶学特性分析表明重组乳酰谷胱甘肽裂合酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为7... 

【文章来源】：河北农业大学河北省

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

GAPDH的催化过程

乳酰谷胱甘肽裂合酶基因000；1 为乳酰谷胱甘肽裂horesis map of lactoylglu构建谷胱甘肽裂合酶基接。 转化入大肠杆性的 LB 平板上筛选，酶切产物在 536T-28a-lac。

28a-lac 重组表达载体构建的双酶切L2000；1 为 pET28a-lac 的 NcoI 和 of double enzyme digestion of the re0; 1: digested products of pET28a-lac酶蛋白浓度及丙酮醛标准曲线测分光光度仪测定相应浓度的标白溶液浓度。测得 3 个标准组肽裂合酶蛋白溶液的吸光值为谷胱甘肽裂合酶蛋白溶液浓度

【参考文献】：
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硕士论文
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本文编号：3120662