定向进化转录调节基因提高漆酶异源表达

发布时间：2021-04-06 19:47

　　为提高Tremetes viscolor漆酶Lcc的表达量,本研究主要针对漆酶转录调节区域进行定向进化。利用易错PCR,选择不同浓度的Mn2+对调节区域进行突变,并以酿酒酵母为宿主细胞进行异源表达,构建S. c/p YES2-Lcc调节子突变库。选用2,2-联氮基双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二胺盐（ABTS）为底物的96孔板测定漆酶酶活高通量筛选方法对突变库中960株突变体进行筛选,并对酶活高的突变体进行摇瓶复筛,最终获得三株遗传稳定性良好的酶活较高地突变体M1、M2、M3,其粗酶液酶活分别是野生型菌株粗酶液酶活的1. 73倍、1. 46倍、1. 37倍,突变菌株M1粗酶液酶活最高可达35. 4 U/L。 

【文章来源】：山东化工. 2020,49(09)

【文章页数】：3 页

【部分图文】：

ep PCR产物及克隆产物电泳结果

重组质粒调节区域示意图

对挑取的突变子利用ABTS检测方法进行初筛，以ABTS为底物测得酶活力高于野生型1.3倍的有46株。对46个优势菌株进行96孔板复筛，每个突变体设置4个平行样，获得13个优势突变体;最后对13个优势突变体进行摇瓶复筛，结果如图3所示。其中，酶活是野性型酶活1.5倍以上的突变株有3株，1.29～1.5倍的突变株有7株，1.04～1.2倍的突变株有3株。突变体M1酶活最高，可达35.4 U/L。2.3 突变体序列测定及比对

【参考文献】：
期刊论文
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[3]刺芹侧耳产漆酶条件优化及对偶氮染料甲基橙的脱色[J]. 谭小珊,王帅杰,吴科元,齐鹏,胡佩雯,张静.  菌物学报. 2019(10)
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[9]灵芝漆酶研究进展[J]. 钱磊,张志军.  食用菌. 2016(04)
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博士论文
[1]耐热性细菌漆酶的高效表达及其在纸浆生物漂白中的应用[D]. 郑志强.江南大学 2015



本文编号：3122026