miR122和miR185对脐带间充质干细胞肝向分化的影响

发布时间：2021-04-20 20:00

　　[目的]基因编辑技术可调节多种细胞功能与特征,并可影响其向特定的方向分化。人脐带间充质干细胞（human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,hUC-MSCs）分化过程受多种因素调节。本研究通过基因转染技术在hUC-MSCs中过表达miR122、miR185,诱导hUC-MSCs肝向诱导分化后,检测其肝细胞相关因子（AFP、ALB、CK18、CK19、HNF4α）的表达及细胞功能,研究二者单独或协同作用对hUC-MSCs肝向分化的影响。[方法]1、hUC-MSCs细胞培养与鉴定:无菌条件下经组织贴壁法分离培养hUC-MSCs,经流式细胞仪检测细胞表面特异分子CD34、CD45、CD90、CD105以及Oct-4的表达情况。对hUC-MSCs分别进行成脂、成骨条件培养液诱导分化以对其多向分化潜能进行鉴定。2、过表达miR122、miR185以及二者共同转染hUC-MSCs的实验:将鉴定合格的细胞进行分组培养,根据riboFECTM CP转染试剂说明采用不同转染浓度处理细胞,根据q-RT-PCR检测过表达效果以及细胞转染后细胞状态确定miRNA转染浓... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：103 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
缩略词表
中文摘要
英文摘要
前言
材料与方法
    1. 实验材料
        1.1 研究对象
        1.2 主要试验试剂
        1.3 主要试验仪器
        1.4 主要耗材
    2. 实验方法
        2.1 实验室常规溶液的配制
        2.2 hUC-MSCs的体外培养与鉴定
        2.3 miR122、miR185在hUC-MSCs内过表达的实验研究
        2.4 miR122、miR185过表达对hUC-MSCs肝向分化影响的研究
        2.5 统计学处理
结果
    1. hUC-MSCs的培养与鉴定结果
        1.1 hUC-MSCs的体外培养结果
        1.2 hUC-MSCs特异分子表达鉴定结果
        1.3 hUC-MSCs分化潜能鉴定结果
    2. miR122、miR185在hUC-MSCs内过表达的实验结果
        2.1 miR122、miR185过表达hUC-MSCs转染浓度的确定
        2.2 miR122、miR185转染hUC-MSCs其过表达效果的维持时长结果
        2.3 miR122、miR185过表达hUC-MSCs后细胞增殖情况
    3. miR122、miR185过表达对hUC-MSCs肝向诱导分化的影响
        3.1 miR122、miR185过表达hUC-MSCs肝向诱导分化后,肝特异蛋白mRNA的表达
        3.2 miR122、miR185过表达hUC-MSCs肝向诱导分化后,其肝特异蛋白的表达
        3.3 肝向诱导分化后细胞功能检测结果
讨论
结论
参考文献
综述
    References
攻读学位期间获得的学术成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]MicroRNA-3963促进小鼠间充质干细胞成脂分化[J]. 刘伟江,李雪,刘元林,王鹏,樊月,滕天怡,白博乾,童越,张伟,张毅.  中国实验血液学杂志. 2018(01)
[2]In vivo hepatic differentiation potential of human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells: Therapeutic effect on liver fibrosis/cirrhosis[J]. Guo-Zun Zhang,Hui-Cong Sun,Li-Bo Zheng,Jin-Bo Guo,Xiao-Lan Zhang.  World Journal of Gastroenterology. 2017(46)
[3]血管内皮生长因子基因转染的人脂肪干细胞具有较强的增殖和分化能力[J]. 陈犹白,张启旭,Charles E.Butler,吴叶文,张丽萍,董江陵,韩岩.  细胞与分子免疫学杂志. 2017(03)
[4]Use of bone morphogenetic proteins in mesenchymal stem cell stimulation of cartilage and bone repair[J]. Sonia Scarfì.  World Journal of Stem Cells. 2016(01)
[5]Mesenchymal stem cells from the human umbilical cord ameliorate fulminant hepatic failure and increase survival in mice[J]. Jin-Feng Yang,Hong-Cui Cao,Qiao-Ling Pan,Jiong Yu,Jun Li,Lan-Juan Li.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2015(02)
[6]Restoring the Treg cell to Th17 cell ratio may alleviate HBV-related acute-on-chronic liver failure[J]. Ying-Hua Niu,Dong-Lin Yin,Hong-Li Liu,Rui-Tian Yi,Yu-Cong Yang,Hong-An Xue,Tian-Yan Chen,Shu-Lin Zhang,Shu-Mei Lin,Ying-Ren Zhao.  World Journal of Gastroenterology. 2013(26)
[7]Hepatocytic differentiation of mesenchymal stem cells in cocultures with fetal liver cells[J]. Claudia Lange,Helge Bruns,Dietrich Kluth,Axel R Zander,Henning C Fiegel.  World Journal of Gastroenterology. 2006(15)



本文编号：3150307