翼手目动物C型溶菌酶的功能及分子进化研究

发布时间：2021-04-30 01:37

　　哺乳动物的C型溶菌酶通过裂解细菌细胞壁的肽聚糖从而在宿主免疫中发挥作用。许多有关C型溶菌酶进化的研究都集中在其消化功能上,其中包括对反刍动物溶菌酶复制基因的研究。有趣的是,在蝙蝠中也有研究发现,食虫蝙蝠的C型溶菌酶基因同样发生了基因复制和适应性进化,研究人员推测这可能与食虫蝙蝠需要消化几丁质有关。另外,研究人员在鼠耳蝠属的蝙蝠中发现了数目最多的四个溶菌酶基因拷贝。以大足鼠耳蝠（Myotis ricketti）为例,我们计算了大足鼠耳蝠中四种溶菌酶的等电点,结果发现它们之间差异较大。为了探索四种溶菌酶的功能差异,我们成功地体外表达了其中的三个蛋白（MricLyz-1,MricLyz-3和MricLyz-4）,并进行了功能实验。结果表明在抗菌方面,MricLyz-1可能保留了溶菌酶蛋白原始的免疫功能。相对于MricLyz-1而言,MricLyz-3的最适pH值偏酸,可能在胃中有表达,而MricLyz-4则适应了极酸的环境,可能在胃中发挥免疫功能。在消化方面,与MricLyz-1相比,MricLyz-4蛋白没有演化出更强的与消化几丁质有关的功能。叶口蝠科蝙蝠作为数量仅次于蝙蝠科的第二大蝙蝠类... 

【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 蝙蝠
        1.1.1 蝙蝠分类
        1.1.2 蝙蝠食性
        1.1.3 蝙蝠与免疫
        1.1.4 蝙蝠与消化
    1.2 基因复制
    1.3 溶菌酶
        1.3.1 溶菌酶在反刍动物中的研究
        1.3.2 溶菌酶在叶猴中的研究
        1.3.3 溶菌酶在食虫蝙蝠中的研究
    1.4 本研究的目的和意义
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 研究意义
第二章 大足鼠耳蝠C型溶菌酶的功能研究
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验方法
    2.2 结果与分析
        2.2.1 大足鼠耳蝠胃组织总RNA提取
        2.2.2 大足鼠耳蝠Lyz基因扩增及胶回收
        2.2.3 大足鼠耳蝠Lyz基因菌液PCR
        2.2.4 亚克隆引物扩增
        2.2.5 表达载体双酶切及回收
        2.2.6 重组质粒鉴定
        2.2.7 重组质粒序列比对
        2.2.8 单克隆的诱导与表达鉴定
        2.2.9 表达优化
        2.2.10 可溶性分析
        2.2.11 亲和纯化
        2.2.12 Western blot和蛋白复性
        2.2.13 蛋白抗菌最适pH值测定
        2.2.14 蛋白消化最适pH值测定
    2.3 小结
    2.4 讨论
第三章 吸血蝙蝠C型溶菌酶的分子进化研究
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验方法
    3.2 结果与分析
        3.2.1 蝙蝠基因组DNA和总RNA提取
        3.2.2 优化引物最适退火温度
        3.2.3 蝙蝠Lyz基因大体系PCR扩增及胶回收
        3.2.4 蝙蝠Lyz基因菌液PCR
        3.2.5 蝙蝠溶菌酶序列比对
    3.3 材料与方法
        3.3.1 材料
        3.3.2 方法
    3.4 结果与分析
        3.4.1 系统发育树结果分析
        3.4.2 选择压力结果分析
        3.4.3 蝙蝠溶菌酶的功能预测结果分析
    3.5 小结
    3.6 讨论
第四章 结论
参考文献
附录
致谢
攻读硕士学位期间发表学术论文



本文编号：3168584