INTS3/INTS6复合物在DNA双链断裂损伤修复中的结构和功能研究

发布时间：2021-05-09 13:21

　　基因组经常受到外界环境和细胞代谢产生的DNA损伤因子的攻击,经过估计每个细胞每天会产生104-105次DNA损伤。真核生物针对DNA双链断裂损伤（DSBs）进化出了两种修复途径:同源重组修复途径（HR）和非同源末端连接途径（NHEJ）。相比于NHEJ,HR更加精确,可以利用姐妹染色单体为模板来复制损伤的DNA序列,因此只发生在细胞周期的S/G2期。HR的第一步就是剪切DNA双链断裂末端,产生一段突出的3’单链DNA,以完成接下来由RAD51重组酶介导的链交换过程。SOSS1复合物作为单链DNA结合蛋白复合物,在HR过程中起着重要作用。SOSS1复合物包含三个蛋白组分:INTS3,SOSSC和hSSB1,其中INTS3作为支架蛋白同时和hSSB1和SOSSC互作。SOSS1复合物可以识别最短长度为35nt的单链DNA,而且SOSS1识别单链DNA的能力比单独的hSSB1高30倍。从INTS3N/hSSB1/SOSSC结构中更可以看出,三个组分中只有hSSB1能结合单链DNA,暗示INTS3的C端可能对识别长的单链DNA有着关键的作用。近来有研究报道INTS6作为Integrator复合物... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：121 页

【学位级别】：博士

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致谢
摘要
Abstract
缩写汇总
1 引言
    1.1 DNA双链断裂损伤修复途径
        1.1.1 C-NHEJ
        1.1.2 Alt-NHEJ
        1.1.3 SSA
        1.1.4 同源重组修复
    1.2 单链DNA结合蛋白
        1.2.1 OB folds结构
        1.2.2 RPA复合物
        1.2.3 hSSB1
    1.3 Integrator复合物
        1.3.1 Integrator复合物在UsnRNA成熟中的作用
        1.3.2 Integrator复合物控制RNAPII的"pause-release"过程
        1.3.3 Integrator复合物介导eRNA转录
        1.3.4 Integrator复合物在DSB修复中的作用
    1.4 研究目的和意义
2 实验材料和方法
    2.1 实验材料
    2.2 实验试剂与仪器
        2.2.1 分子克隆试剂与仪器
        2.2.2 蛋白表达纯化试剂与仪器
        2.2.3 蛋白结晶试剂与仪器
        2.2.4 细胞实验试剂及仪器
    2.3 数据处理软件
    2.4 实验方法
        2.4.1 分子克隆
        2.4.2 蛋白质表达
        2.4.3 蛋白质纯化
        2.4.4 蛋白质结晶
        2.4.5 蛋白质结构解析
        2.4.6 生化实验
        2.4.7 细胞实验
3 实验结果
    3.1 INTS3与INTS6表达与纯化
        3.1.1 INTS6c表达纯化
        3.1.2 INTS3(560-995)纯化与限制性酶切
        3.1.3 INTS3cl/INTScs/INTS6c纯化与结晶
        3.1.4 INTS3[560-915)/INTS6c纯化与结晶
        3.1.5 INTS3 (560-915)/INTS6c纯化与结晶
        3.1.6 INTS3(560-905)/(925-995)共表达纯化与复合物结晶
    3.2 INTS3c /INTS6c结构解析
    3.3 INTS3c/INTS6c复合物结构
        3.3.1 INTS3c/INTS6c整体结构
        3.3.2 INTS3c二聚体结合界面
        3.3.3 INTS3c/INTS6c结合界面
    3.4 INTS3/INTS6影响同源重组修复过程
        3.4.1 INTS3/INTS6突变体互作实验
        3.4.2 INTS3影响INTS6核定位
        3.4.3 INTS3/INTS6影响RAD51 foci形成
        3.4.4 INTS3/INTS6影响细胞存活
    3.5 INTS3二聚体帮助hSSB1识别长链ssDNA
        3.5.1 INTS3/hSSB1复合物表达纯化
        3.5.2 INTS3/hSSB1与dT12和dT48凝胶迁移电泳实验
        3.5.3 INTS3/hSSB1与dT48表面等离子共振实验
4 小结与讨论
参考文献
作者简历及科研成果



本文编号：3177376